Como fazer um gel de agarose

Escolha a porcentagem

A porcentagem define o tamanho de DNA que o gel separa melhor. Porcentagens baixas deixam poros grandes para fragmentos grandes; as altas resolvem os pequenos.

0,7%: cerca de 0,8 a 12 kb
1%: cerca de 0,5 a 10 kb, a escolha comum para produtos de PCR e plasmídeos
1,5%: cerca de 0,2 a 3 kb
2%: cerca de 50 pb a 2 kb

Calcule as quantidades

A porcentagem do gel é gramas de agarose por 100 mL de tampão: gramas = % × volume (mL) ÷ 100. Um gel de 50 mL a 1% precisa de 0,5 g. Prepare o tampão 1× a partir de um estoque: 1 mL de TAE 50× para 50 mL, ou 5 mL de TBE 10×. Use o mesmo tampão na cuba.

Verta o gel

Pese a agarose num frasco e adicione o tampão 1×.
Aqueça no micro-ondas em intervalos curtos, agitando entre eles, até a solução ficar totalmente transparente, sem grãos boiando. Fique de olho: ela pode ferver de repente.
Deixe esfriar a cerca de 50 a 60 °C, o suficiente para segurar o frasco.
Adicione o corante de DNA se você cora no gel, agite e verta na bandeja com o pente no lugar.
Deixe solidificar por 20 a 30 minutos e retire o pente com cuidado.

Corra o gel

Coloque o gel na cuba com os poços do lado do eletrodo negativo (preto), já que o DNA corre para o positivo (vermelho), e cubra com tampão. Aplique as amostras misturadas com tampão de amostra ao lado de um marcador de DNA e corra a cerca de 5 a 8 volts por cm entre os eletrodos até a frente do corante percorrer dois terços do gel.

Calculadoras

A calculadora de gel de agarose dá a agarose, o tampão, a água e o corante para qualquer porcentagem e volume. Para aplicar uma quantidade definida de DNA, meça antes com a calculadora de concentração de DNA.

Ferramentas deste guia

Calculadora de gel de agarose Calculadora de concentração de DNA

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