Como medir a concentração de proteínas a A280

Por que as proteínas absorvem a 280 nm

O triptofano e a tirosina absorvem luz ultravioleta a 280 nm, e as pontes dissulfeto contribuem um pouco. Como a quantidade de cada um varia entre proteínas, cada proteína tem seu próprio coeficiente de extinção, e a leitura de A280 só é tão boa quanto o coeficiente usado.

A fórmula

Pela lei de Beer-Lambert, concentração (M) = A280 ÷ (ε × caminho óptico), em que ε é o coeficiente de extinção molar em M⁻¹ cm⁻¹. Multiplique pelo peso molecular para ter mg/mL. Um atalho é a Abs 0,1%, a absorbância de uma solução de 1 mg/mL, que é ε ÷ peso molecular: mg/mL = A280 ÷ Abs 0,1%.

O coeficiente de extinção pela sequência

O método de Pace e colaboradores (1995) conta os resíduos que absorvem:

ε = 5.500 × Trp + 1.490 × Tyr + 125 × cistinas

Uma cistina é um par de cisteínas unidas por ponte dissulfeto; retire esse termo para uma proteína reduzida.

Um exemplo resolvido

A albumina sérica bovina tem ε = 43.824 M⁻¹ cm⁻¹ e peso molecular de 66.430 Da, então sua Abs 0,1% é 43.824 ÷ 66.430 = 0,66. Uma leitura de 0,33 numa cubeta de 1 cm é 0,33 ÷ 0,66 = 0,5 mg/mL, ou 7,5 µM.

Armadilhas

Faça o branco com o mesmo tampão da proteína; imidazol, detergentes e alguns redutores absorvem a 280 nm.
Contaminação com ácidos nucleicos aumenta a A280. Uma proteína pura tem razão A260/A280 por volta de 0,6; valores perto de 1 ou acima indicam DNA ou RNA.
Agregados espalham a luz e dão leituras altas. Centrifugue ou filtre amostras turvas.
Mantenha as leituras entre 0,1 e 1,0, diluindo se preciso.
Proteínas sem triptofano nem tirosina não podem ser medidas assim; use um ensaio de Bradford ou BCA.

Calculadoras

A calculadora de concentração de proteínas calcula o coeficiente de extinção a partir de uma sequência colada, ou usa um coeficiente conhecido ou a Abs 0,1%, e dá mg/mL e µM. A calculadora da lei de Beer-Lambert resolve a equação geral, e Peso molecular de proteínas dá a massa a partir de uma sequência.

Ferramentas deste guia

Calculadora de concentração de proteínas (A280)Calculadora da lei de Beer-Lambert Peso molecular de proteína

Mais guias

Como abrir arquivos HEIC no Windows Como reduzir o tamanho de um PDF Como remover a localização das fotos Como extrair o áudio de um vídeo Como criar um QR code para o seu Wi-Fi Como assinar um PDF Como verificar o checksum de um arquivo (SHA-256)PNG, JPG ou WebP: qual formato de imagem usar Como juntar arquivos PDF Como copiar o texto de uma imagem Como converter JPG para PDF Como converter um PDF para JPG Como dividir um PDF ou extrair páginas Como girar um PDF de forma permanente Como adicionar números de página a um PDF Como colocar marca d'água em um PDF Como converter HEIC para JPG no Mac Como converter WebP para JPG Como reduzir o tamanho de uma imagem Como converter um vídeo para GIF Como converter WAV para MP3 Como criar uma senha forte Como converter Celsius para Fahrenheit GB ou GiB: por que seu disco mostra menos espaço Como calcular porcentagem Como calcular os dias entre duas datas O que é um timestamp Unix Como comparar dois arquivos de texto Como contar as palavras de um documento Como ler um QR code de uma captura de tela ou imagem O que é um hash: MD5, SHA-1 e SHA-256 explicados Como comprimir uma foto para 20 KB (ou qualquer tamanho)Como remover o fundo de uma foto Como testar seu microfone Como procurar pixels mortos numa tela Como gravar a tela Como criar um toque para iPhone Como comprimir um vídeo para enviar Como remover a senha de um PDF Como colocar senha num PDF Como preencher um formulário PDF Como converter um PDF para Word Como desfocar um rosto numa foto Como calcular seu IMC Como calcular a parcela de um financiamento imobiliário Como marcar uma reunião entre fusos horários O que é uma expressão cron?Como obter o complemento reverso de uma sequência de DNA Como traduzir DNA em proteína Como converter GenBank para FASTA Como encontrar sítios de restrição em uma sequência de DNA Como alinhar duas sequências de DNA ou de proteína Como desenhar e conferir primers de PCR Como calcular a massa molar Como balancear uma equação química Como preparar uma solução de molaridade conhecida Como calcular uma diluição (C1V1 = C2V2)Como calcular o pH Como calcular a concentração de DNA a partir da A260 Como calcular a quantidade de inserto para uma ligação Como converter RPM em g (RCF)Como contar células com um hemocitômetro Como usar o quadro de Punnett Como fazer um orçamento com a regra 50/30/20 Bola de neve ou avalanche para quitar dívidas Quanto preciso para me aposentar?Como converter salário em valor por hora Margem de lucro ou markup Como calcular IVA e imposto sobre vendas Como fazer uma fatura Quanto imóvel eu posso comprar?Como ler o código de cores de resistores Como escolher o resistor de um LED Como calcular a queda de tensão num cabo Quanto concreto eu preciso?Quanta tinta eu preciso?Como calcular uma sub-rede Regras dos algarismos significativos Como funciona a amortização de um empréstimo ROI x CAGR: como medir o retorno de um investimento Como a inflação corrói suas economias Como calcular seu GPA Como calcular a gorjeta Estratégia de Campo Minado: padrões e dicas Estratégias de Sudoku para iniciantes Como vencer no 2048 Estratégia de Paciência: como vencer mais partidas Como digitar mais rápido Regex básico: guia para iniciantes com exemplos Cores HEX, RGB e HSL O que é Base64 (e codificação de URL)?Como calcular a meia-vida A lei dos gases ideais explicada Como funciona um divisor de tensão Cálculos do timer 555 Como calcular a inclinação do telhado Como calcular pés de tábua (board feet)Estatísticas de sequências de DNA e proteínas explicadas Como fazer uma diluição seriada Como calcular a variação de expressão em qPCR com ΔΔCt Como calcular a Tm de um primer e a temperatura de anelamento Como ressuspender primers e oligos Como calcular a MOI de uma infecção viral Como encontrar o reagente limitante Como encontrar a fórmula mínima Molaridade, molalidade e normalidade Como contar as palavras de um PDF