Como fazer uma diluição seriada

O que é uma diluição seriada

Uma diluição seriada é uma sequência de diluições em que cada tubo é feito a partir do anterior. Ela chega a diluições muito grandes, como uma em um milhão, com volumes fáceis de pipetar, e gera uma série de concentrações igualmente espaçadas para curvas-padrão e contagens em placa.

Como fazer uma diluição seriada 1:10

Identifique os tubos e coloque 900 µL de diluente (água, tampão ou meio) em cada um.
Adicione 100 µL da amostra ao primeiro tubo e misture bem pipetando ou no vórtex. Esse tubo é uma diluição 1:10 (10⁻¹).
Com uma ponteira nova, passe 100 µL do primeiro tubo para o segundo e misture. Esse é 10⁻².
Repita ao longo da fileira. Cada tubo fica dez vezes mais diluído que o anterior.

Para uma série 1:2, usada em curvas-padrão e titulações de anticorpos, misture volumes iguais, como 500 µL do tubo anterior em 500 µL de diluente.

Como calcular a diluição total

O fator de diluição de um passo é volume total ÷ volume transferido: (100 + 900) ÷ 100 = 10. A diluição total de um tubo é o produto dos fatores de cada passo, então o sexto tubo de uma série 1:10 está diluído 10⁶ vezes. Sua concentração é a inicial ÷ 10⁶.

Contando colônias a partir de uma diluição

Plaqueie um volume conhecido de alguns tubos e conte a placa com 30 a 300 colônias. Então:

UFC por mL = colônias × diluição total ÷ volume plaqueado (mL)

45 colônias de 0,1 mL do tubo 10⁻⁶ dão 45 × 10⁶ ÷ 0,1 = 4,5 × 10⁸ UFC/mL na amostra original.

Dicas para diluir com precisão

Troque a ponteira entre os tubos; o líquido carregado acrescenta um erro que cresce ao longo da série.
Misture bem cada tubo antes da próxima transferência.
Pipete volumes no meio da faixa da pipeta, não no seu valor mínimo.

Calculadoras

A calculadora de diluição seriada mostra a concentração de cada tubo e quanto transferir e adicionar. Para uma única diluição, use a calculadora de diluição; para contar células antes de diluir, a calculadora de hemocitômetro.

Ferramentas deste guia

Calculadora de diluição seriada Calculadora de diluição Calculadora de hemocitômetro

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