Qu’est-ce qu’une dilution en série
Une dilution en série est une suite de dilutions où chaque tube est préparé à partir du précédent. Elle permet d’atteindre de très fortes dilutions, comme un millionième, avec des volumes faciles à pipeter, et donne une gamme de concentrations régulièrement espacées pour les courbes étalons et les dénombrements.
Comment faire une dilution en série au 1/10
- Étiquetez les tubes et mettez 900 µL de diluant (eau, tampon ou milieu) dans chacun.
- Ajoutez 100 µL d’échantillon dans le premier tube et mélangez bien à la pipette ou au vortex. Ce tube est une dilution au 1/10 (10−1).
- Avec un cône neuf, transférez 100 µL du premier tube dans le deuxième et mélangez. C’est 10−2.
- Continuez le long de la série. Chaque tube est dix fois moins concentré que le précédent.
Pour une série au 1/2, utilisée pour les courbes étalons et les titrages d’anticorps, mélangez des volumes égaux, par exemple 500 µL du tube précédent dans 500 µL de diluant.
Calculer la dilution totale
Le facteur de dilution d’une étape est volume total ÷ volume transféré : (100 + 900) ÷ 100 = 10. La dilution totale d’un tube est le produit des facteurs de chaque étape : le sixième tube d’une série au 1/10 est donc dilué 106 fois. Sa concentration vaut la concentration de départ ÷ 106.
Dénombrer les colonies à partir d’une dilution
Étalez un volume connu de quelques tubes et comptez la boîte qui porte 30 à 300 colonies. Alors :
UFC par mL = colonies × dilution totale ÷ volume étalé (mL)
45 colonies issues de 0,1 mL du tube 10−6 donnent 45 × 106 ÷ 0,1 = 4,5 × 108 UFC/mL dans l’échantillon de départ.
Conseils pour des dilutions précises
- Changez de cône entre les tubes ; le liquide entraîné ajoute une erreur qui grandit le long de la série.
- Mélangez bien chaque tube avant le transfert suivant.
- Pipetez des volumes au milieu de la plage de la pipette, pas à son réglage minimal.
Calculateurs
Le calcul de dilution en série donne la concentration de chaque tube et les volumes à transférer et à ajouter. Pour une seule dilution, utilisez le calcul de dilution ; pour compter les cellules avant de diluer, le calcul sur cellule de comptage.