Cara Membuat Pengenceran Bertingkat

Apa itu pengenceran bertingkat

Pengenceran bertingkat adalah rangkaian pengenceran di mana setiap tabung dibuat dari tabung sebelumnya. Cara ini mencapai pengenceran yang sangat besar, seperti satu per sejuta, dengan volume yang mudah dipipet, dan menghasilkan deret konsentrasi berjarak sama untuk kurva standar dan hitungan cawan.

Cara membuat pengenceran bertingkat 1:10

1. Beri label pada tabung dan isi masing-masing dengan 900 µL pengencer (air, buffer, atau medium).
2. Tambahkan 100 µL sampel ke tabung pertama dan campur rata dengan memipet naik-turun atau vorteks. Tabung ini adalah pengenceran 1:10 (10⁻¹).
3. Dengan tip baru, pindahkan 100 µL dari tabung pertama ke tabung kedua lalu campur. Ini 10⁻².
4. Ulangi sepanjang deret. Setiap tabung sepuluh kali lebih encer daripada tabung sebelumnya.

Untuk deret 1:2, yang dipakai untuk kurva standar dan titrasi antibodi, campurkan volume yang sama, misalnya 500 µL dari tabung sebelumnya ke 500 µL pengencer.

Menghitung pengenceran total

Faktor pengenceran satu langkah adalah volume total ÷ volume yang dipindahkan: (100 + 900) ÷ 100 = 10. Pengenceran total sebuah tabung adalah hasil kali faktor tiap langkah, jadi tabung keenam dalam deret 1:10 diencerkan 10⁶ kali. Konsentrasinya adalah konsentrasi awal ÷ 10⁶.

Menghitung koloni dari pengenceran

Sebarkan volume tertentu dari beberapa tabung dan hitung cawan yang berisi 30 sampai 300 koloni. Lalu:

CFU per mL = koloni × pengenceran total ÷ volume yang disebar (mL)

45 koloni dari 0,1 mL tabung 10⁻⁶ memberi 45 × 10⁶ ÷ 0,1 = 4,5 × 10⁸ CFU/mL pada sampel asli.

Tips agar pengenceran akurat

• Ganti tip di setiap tabung; cairan yang terbawa menambah galat yang membesar sepanjang deret.
• Campur setiap tabung dengan baik sebelum pemindahan berikutnya.
• Pipet volume di tengah rentang pipet, bukan pada setelan terkecilnya.

Kalkulator

Kalkulator pengenceran bertingkat menampilkan konsentrasi setiap tabung serta berapa yang dipindahkan dan ditambahkan. Untuk satu kali pengenceran, pakai kalkulator pengenceran; untuk menghitung sel sebelum diencerkan, pakai kalkulator hemositometer.