Dari absorbansi ke konsentrasi
Asam nukleat menyerap sinar ultraviolet pada 260 nm. Dengan jalur cahaya 1 cm, A260 sebesar 1,0 setara dengan kira-kira:
- 50 ng/µL DNA untai ganda
- 40 ng/µL RNA
- 33 ng/µL DNA untai tunggal
Konsentrasi = A260 × faktor × pengenceran. Sampel yang diencerkan 1:10 dan terbaca 0,25 mengandung 0,25 × 50 × 10 = 125 ng/µL dsDNA. Pembacaan paling andal di antara sekitar 0,1 dan 1,0; encerkan sampel yang lebih pekat. Oligo pendek lebih bervariasi menurut komposisi basanya, jadi sebaiknya dihitung dari koefisien ekstingsinya sendiri.
Rasio kemurnian
- A260/280 sekitar 1,8 untuk DNA dan 2,0 untuk RNA. Nilai yang lebih rendah menandakan protein atau fenol.
- A260/230 sekitar 2,0 sampai 2,2. Nilai yang lebih rendah menandakan garam guanidin, EDTA, atau karbohidrat yang tersisa dari proses isolasi.
Dari ng ke jumlah salinan
Untuk standar qPCR Anda perlu jumlah molekul. Satu pasang basa dsDNA berbobot sekitar 618 g/mol, jadi 1 ng plasmid 3.000 bp setara dengan sekitar 3,2 × 108 salinan.
Kalkulator
Kalkulator Konsentrasi DNA mengolah pembacaan dan pengenceran Anda serta memeriksa rasionya. Kalkulator Jumlah Salinan DNA mengonversi antara ng dan salinan. Untuk molekul lain, Kalkulator Hukum Beer-Lambert bekerja dari koefisien ekstingsi.