De la absorbancia a la concentración
Los ácidos nucleicos absorben luz ultravioleta a 260 nm. Con un paso óptico de 1 cm, una A260 de 1,0 corresponde aproximadamente a:
- 50 ng/µL de ADN de doble cadena
- 40 ng/µL de ARN
- 33 ng/µL de ADN de cadena sencilla
Concentración = A260 × factor × dilución. Una muestra diluida 1:10 que da 0,25 contiene 0,25 × 50 × 10 = 125 ng/µL de ADN de doble cadena. Las lecturas son más fiables entre 0,1 y 1,0 aproximadamente; diluye las muestras más concentradas. Los oligos cortos varían más según su composición de bases, así que es mejor calcularlos con su propio coeficiente de extinción.
Relaciones de pureza
- A260/280 de alrededor de 1,8 para el ADN y 2,0 para el ARN. Valores más bajos apuntan a proteínas o fenol.
- A260/230 de alrededor de 2,0 a 2,2. Valores más bajos apuntan a sales de guanidina, EDTA o carbohidratos que quedaron de la purificación.
De ng a copias
Para los estándares de qPCR necesitas el número de moléculas. Un par de bases de ADN de doble cadena pesa unos 618 g/mol, así que 1 ng de un plásmido de 3000 pb son unas 3,2 × 108 copias.
Calculadoras
La Calculadora de concentración de ADN toma tus lecturas y la dilución y comprueba las relaciones. La Calculadora de número de copias de ADN pasa de ng a copias y al revés. Para otras moléculas, la Calculadora de la ley de Beer-Lambert trabaja con el coeficiente de extinción.