एब्ज़ॉर्बेंस से सांद्रता
न्यूक्लिक एसिड 260 nm पर पराबैंगनी प्रकाश सोखते हैं। 1 cm पाथ के साथ, 1.0 का A260 लगभग इसके बराबर है:
- डबल-स्ट्रैंडेड DNA के 50 ng/µL
- RNA के 40 ng/µL
- सिंगल-स्ट्रैंडेड DNA के 33 ng/µL
सांद्रता = A260 × फ़ैक्टर × डाइल्यूशन। 1:10 पतला किया सैंपल जो 0.25 पढ़ता है, उसमें 0.25 × 50 × 10 = 125 ng/µL dsDNA है। रीडिंग लगभग 0.1 और 1.0 के बीच सबसे भरोसेमंद होती है; गाढ़े सैंपल पतले करें। छोटे ओलिगो बेस की बनावट के साथ ज़्यादा बदलते हैं, इसलिए उन्हें उनके अपने एक्सटिंक्शन कोएफ़िशिएंट से निकालना बेहतर है।
शुद्धता के अनुपात
- A260/280 DNA के लिए लगभग 1.8 और RNA के लिए 2.0। कम मान प्रोटीन या फ़िनॉल की ओर इशारा करते हैं।
- A260/230 लगभग 2.0 से 2.2। कम मान गुआनिडीन सॉल्ट, EDTA या कार्बोहाइड्रेट की ओर इशारा करते हैं जो प्रेप से बचे रह गए।
ng से कॉपी
qPCR स्टैंडर्ड के लिए अणुओं की संख्या चाहिए। dsDNA का एक बेस पेयर लगभग 618 g/mol का होता है, इसलिए 3,000 bp प्लाज़्मिड का 1 ng लगभग 3.2 × 108 कॉपी है।
कैलकुलेटर
DNA सांद्रता कैलकुलेटर आपकी रीडिंग और डाइल्यूशन लेकर अनुपात जाँचता है। DNA प्रति संख्या कैलकुलेटर ng और कॉपी के बीच बदलता है। दूसरे अणुओं के लिए बीयर-लैम्बर्ट नियम कैलकुलेटर एक्सटिंक्शन कोएफ़िशिएंट से काम करता है।