रेस्ट्रिक्शन एंज़ाइम कैसे काटते हैं
हर एंज़ाइम एक छोटा सीक्वेंस पहचानता है, अक्सर 4 से 8 बेस का पैलिंड्रोम, और उसके अंदर या पास में काटता है। EcoRI, GAATTC पहचानता है और दोनों स्ट्रैंड पर G और A के बीच काटता है, जिससे चार बेस के AATT उभरे सिरे बचते हैं, जिन्हें स्टिकी एंड कहते हैं। EcoRV, GATATC को ठीक बीच से काटता है और ब्लंट एंड छोड़ता है।
कौन-से एंज़ाइम काटते हैं
- सीक्वेंस को रेस्ट्रिक्शन सारांश में पेस्ट करें।
- लीनियर या सर्कुलर चुनें। प्लाज़्मिड सर्कुलर होता है।
- एंज़ाइम की सूची, कट की संख्या, उनकी जगह और फ़्रैगमेंट के साइज़ पढ़ें।
जो एंज़ाइम सिर्फ़ एक बार काटते हैं, वही प्लाज़्मिड खोलने के काम आते हैं। सर्कुलर DNA में n कट से n फ़्रैगमेंट बनते हैं; लीनियर में n + 1।
सीक्वेंस पर साइट देखें
रेस्ट्रिक्शन मैप सीक्वेंस छापता है और हर कट साइट उसके ऊपर दिखाता है। इससे आसानी से जाँचा जा सकता है कि कोई साइट वहीं है जहाँ आप सोचते हैं, या किसी जीन के दोनों ओर दो एंज़ाइम ढूँढे जा सकते हैं।
प्रोटीन बदले बिना साइट जोड़ें
अगर सुविधाजनक साइट न हो, तो कभी-कभी एक या दो साइलेंट म्यूटेशन से साइट बन जाती है और प्रोटीन वही रहता है। डाइजेस्ट के लिए उत्परिवर्तन कोडिंग सीक्वेंस में ऐसी जगहें बताता है, जिन्हें साइट-डायरेक्टेड म्यूटाजेनेसिस या प्राइमर में इस्तेमाल किया जा सकता है।