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हीमोसाइटोमीटर से कोशिकाएँ कैसे गिनें

गिनती

  1. कोशिकाओं को ट्रिपैन ब्लू के साथ मिलाएँ, अक्सर 1:1, जो मृत कोशिकाओं को नीला रंग देता है।
  2. कवरस्लिप के नीचे लगभग 10 µL भरें।
  3. चारों कोनों के बड़े वर्गों में बिना रंग वाली कोशिकाएँ गिनें। ऊपर और बाईं लाइन को छूने वाली कोशिकाएँ गिनें, नीचे और दाईं लाइन वाली नहीं, ताकि कोई दो बार न गिनी जाए।
  4. वायबिलिटी चाहिए तो नीली कोशिकाएँ अलग गिनें।

फ़ॉर्मूला

हर बड़ा वर्ग 1 mm × 1 mm और 0.1 mm गहरा होता है, यानी 0.1 µL, या 10−4 mL। इसलिए:

प्रति mL कोशिकाएँ = प्रति वर्ग औसत गिनती × डाइल्यूशन फ़ैक्टर × 104

50, 46, 52 और 48 की गिनती का औसत 49 है। 1:1 ट्रिपैन ब्लू डाइल्यूशन (फ़ैक्टर 2) के साथ: 49 × 2 × 104 = 9.8 × 105 कोशिकाएँ/mL।

वायबिलिटी जीवित कोशिकाओं को कुल कोशिकाओं से भाग देकर 100 से गुणा करने पर मिलती है।

डबलिंग टाइम

दो गिनतियों से: डबलिंग टाइम = समय × ln 2 ÷ ln(N2 ÷ N1)। जो कोशिकाएँ 48 घंटे में 1 × 105 से 8 × 105 हो जाती हैं, वे तीन बार दोगुनी हुईं, हर 16 घंटे में।

कैलकुलेटर

हीमोसाइटोमीटर कैलकुलेटर प्रति mL कोशिकाएँ, वायबिलिटी और तय संख्या की कोशिकाएँ सीड करने का आयतन बताता है। कोशिका दोहरीकरण समय कैलकुलेटर डबलिंग टाइम और ग्रोथ रेट निकालता है।

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