DNA प्रति संख्या कैसे निकालें

फ़ॉर्मूला

प्रतियाँ = (ng में द्रव्यमान × 6.022 × 10²³) ÷ (bp में लंबाई × 660 × 10⁹)

660 g/mol द्विरज्जुक DNA के एक बेस युग्म का औसत द्रव्यमान है (एकरज्जुक DNA में प्रति बेस लगभग 330 और RNA में 340), 6.022 × 10²³ आवोगाद्रो संख्या है और 10⁹ नैनोग्राम को ग्राम में बदलता है। अणु जितना लंबा, एक नैनोग्राम में उतनी कम प्रतियाँ।

हल किया उदाहरण

5,000 bp प्लाज़्मिड के 1 ng में कितने अणु हैं?

1. मोलर द्रव्यमान: 5,000 × 660 = 3.3 × 10⁶ g/mol।
2. मोल: 1 × 10⁻⁹ g ÷ 3.3 × 10⁶ g/mol = 3.03 × 10⁻¹⁶ mol।
3. प्रतियाँ: 3.03 × 10⁻¹⁶ × 6.022 × 10²³ = 1.8 × 10⁸ प्रतियाँ।

काम का नियम: 1 kb टुकड़े का 1 ng लगभग 9 × 10⁸ प्रतियाँ है, और 1 bp का 1 ng 9 × 10¹¹ होता, इसलिए bp में लंबाई से भाग दें।

प्रतियों से द्रव्यमान तक

पुनर्व्यवस्थित: द्रव्यमान (ng) = प्रतियाँ × लंबाई × 660 × 10⁹ ÷ 6.022 × 10²³। उसी प्लाज़्मिड की 10⁶ प्रतियों के लिए यह 10⁶ × 5,000 × 660 × 10⁹ ÷ 6.022 × 10²³ = 5.5 × 10⁻³ ng, यानी 5.5 pg है।

qPCR मानक वक्र

निरपेक्ष मात्रात्मकता के लिए ज्ञात प्रति संख्या वाले मानक चाहिए। प्लाज़्मिड सांद्रता मापें, उसे प्रति µL प्रतियों में बदलें, फिर दस-गुना क्रमिक तनुकरण बनाएँ, जैसे 10⁸ से 10² प्रतियाँ प्रति µL तक। इन्हें नमूनों के साथ चलाएँ; log प्रतियों के विरुद्ध Ct का ग्राफ़ −3.3 के पास ढलान वाली सीधी रेखा होना चाहिए (100% दक्षता)। रैखिक किया प्लाज़्मिड सुपरकॉइल्ड से ज़्यादा सटीक मानक देता है, और tRNA या यीस्ट RNA जैसा वाहक कम-प्रति तनुकरणों को ट्यूब की दीवार से चिपकने से रोकता है।

कैलकुलेटर

DNA प्रति संख्या कैलकुलेटर किसी भी लंबाई के DNA या RNA के लिए नैनोग्राम और प्रतियों के बीच बदलता है। A260 रीडिंग से सांद्रता DNA सांद्रता कैलकुलेटर से पाएँ; निरपेक्ष के बजाय सापेक्ष मात्रात्मकता के लिए ΔΔCt कैलकुलेटर इस्तेमाल करें।