सूत्र
ओलिगो सूखे रूप में आते हैं, और मात्रा ट्यूब या डेटा शीट पर nmol में लिखी होती है। µM स्टॉक के लिए:
डालने का आयतन (µL) = nmol × 1,000 ÷ सांद्रता (µM)
आम 100 µM स्टॉक के लिए यह सीधे nmol × 10 है: 25.4 nmol वाली ट्यूब में 254 µL डालें। अगर शीट पर µg लिखा हो, तो nmol = µg × 1,000 ÷ आणविक भार।
चरण दर चरण
- बंद ट्यूब को थोड़ी देर सेंट्रीफ़्यूज करें ताकि सूखा पेलेट ढक्कन पर नहीं, नीचे रहे।
- निकाला गया आयतन कम-EDTA वाला TE (10 mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8) या न्यूक्लिएज़-मुक्त पानी डालें।
- वॉर्टेक्स करें, कमरे के तापमान पर कुछ मिनट छोड़ें, फिर से वॉर्टेक्स करें और नीचे घुमा लें।
कार्यशील घोल बनाना
PCR में प्राइमर आमतौर पर 10 µM पर इस्तेमाल होते हैं। 100 µM स्टॉक से यह 1:10 तनुकरण है: 10 µL स्टॉक और 90 µL पानी या TE से 10 µM का 100 µL बनता है। अलग कार्यशील ट्यूब रखने से स्टॉक में बार-बार पिपेट नहीं डालना पड़ता।
पानी या TE?
TE pH को स्थिर रखता है, जबकि हल्का अम्लीय पानी धीरे-धीरे DNA को नुकसान पहुँचा सकता है, इसलिए TE वाले स्टॉक ज़्यादा टिकते हैं। कम-EDTA वाले TE का थोड़ा EDTA कार्यशील तनुकरण पर इतना मैग्नीशियम नहीं बाँधता कि PCR बिगड़े। कुछ काम, जैसे कुछ सीक्वेंसिंग अभिक्रियाएँ, पानी माँगते हैं।
भंडारण
स्टॉक −20 °C पर रखें। उन्हें कुछ एलिकॉट में बाँट लें, ताकि एक दूषित या बार-बार पिघली ट्यूब से पूरा ऑर्डर न जाए; सूखे ओलिगो सालों तक और TE वाले स्टॉक जमाकर कई महीनों तक चलते हैं।
कैलकुलेटर
ओलिगो रीसस्पेंशन कैलकुलेटर किसी भी स्टॉक सांद्रता के लिए आयतन और कार्यशील घोल का मिश्रण बताता है। PCR प्राइमर आँकड़े प्राइमर का आणविक भार देता है, और डाइल्यूशन कैलकुलेटर बाकी कोई भी तनुकरण संभालता है।