공식
올리고는 건조 상태로 오며, 양은 튜브나 데이터 시트에 nmol로 적혀 있습니다. µM 스톡을 만들려면:
넣을 부피 (µL) = nmol × 1,000 ÷ 농도 (µM)
흔히 쓰는 100 µM 스톡이면 간단히 nmol × 10입니다. 25.4 nmol 튜브에는 254 µL를 넣습니다. µg으로 적혀 있으면 nmol = µg × 1,000 ÷ 분자량입니다.
단계별 방법
- 뚜껑을 닫은 채 튜브를 잠깐 원심분리해 건조된 펠릿이 뚜껑이 아닌 바닥에 모이게 합니다.
- 계산한 양의 저 EDTA TE(10 mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8)나 뉴클레아제가 없는 물을 넣습니다.
- 볼텍스하고 실온에 몇 분 둔 뒤 다시 볼텍스하고 스핀다운합니다.
작업 용액 만들기
PCR에서는 보통 프라이머를 10 µM로 씁니다. 100 µM 스톡에서는 10배 희석으로, 스톡 10 µL에 물이나 TE 90 µL를 넣으면 10 µM 용액 100 µL가 됩니다. 작업용 튜브를 따로 두면 스톡에 피펫을 반복해서 넣지 않아도 됩니다.
물과 TE 중 무엇을
TE는 pH를 일정하게 유지하고, 약산성인 물은 DNA를 서서히 손상시킬 수 있어 TE 스톡이 더 오래갑니다. 저 EDTA TE의 소량 EDTA는 작업 희석 농도에서 PCR에 영향을 줄 만큼 마그네슘과 결합하지 않습니다. 일부 시퀀싱 반응처럼 물을 요구하는 용도도 있습니다.
보관
스톡은 −20 °C에 보관합니다. 몇 개로 분주해 두면 한 튜브가 오염되거나 여러 번 녹았다 얼어도 주문 전체를 잃지 않습니다. 건조 올리고는 몇 년, TE 스톡은 냉동으로 여러 달 보관할 수 있습니다.
계산기
올리고 용해 계산기는 어떤 스톡 농도든 필요한 부피와 작업 용액 혼합량을 알려 줍니다. 프라이머 분자량은 PCR 프라이머 통계로, 그 밖의 희석은 희석 계산기로 구할 수 있습니다.