연속 희석이란
연속 희석은 각 튜브를 바로 앞 튜브로 만드는 희석의 연속입니다. 백만 분의 1 같은 큰 희석도 피펫으로 다루기 쉬운 부피로 할 수 있고, 표준 곡선과 평판 계수에 쓸 일정한 간격의 농도 계열을 얻을 수 있습니다.
10배 연속 희석 방법
- 튜브에 라벨을 붙이고 각각 희석액(물, 완충액, 배지)을 900 µL씩 넣습니다.
- 첫 번째 튜브에 시료 100 µL를 넣고 피펫팅이나 볼텍스로 잘 섞습니다. 이 튜브가 10배(10−1) 희석입니다.
- 새 팁으로 첫 번째 튜브에서 100 µL를 두 번째 튜브로 옮겨 섞습니다. 이것이 10−2입니다.
- 같은 과정을 반복합니다. 각 튜브는 앞 튜브보다 10배 묽습니다.
표준 곡선과 항체 역가 측정에 쓰는 2배 희석 계열은 앞 튜브 500 µL를 희석액 500 µL에 넣는 식으로 같은 부피를 섞습니다.
총 희석 배수 구하기
한 단계의 희석 배수는 전체 부피 ÷ 옮긴 부피로, (100 + 900) ÷ 100 = 10입니다. 각 튜브의 총 희석 배수는 단계별 배수를 모두 곱한 값이므로, 10배 계열의 여섯 번째 튜브는 106배 희석입니다. 농도는 처음 농도 ÷ 106입니다.
희석액으로 콜로니 세기
몇 개의 튜브에서 정해진 부피를 도말하고 콜로니가 30~300개인 평판을 셉니다. 그러면:
mL당 CFU = 콜로니 수 × 총 희석 배수 ÷ 도말 부피 (mL)
10−6 튜브에서 0.1 mL를 도말해 45개가 나왔다면 45 × 106 ÷ 0.1 = 원래 시료에서 4.5 × 108 CFU/mL입니다.
정확하게 희석하는 요령
- 튜브마다 팁을 바꿉니다. 묻어 온 액체의 오차는 계열 뒤로 갈수록 커집니다.
- 다음 튜브로 옮기기 전에 각 튜브를 충분히 섞습니다.
- 피펫의 최솟값이 아니라 범위의 중간 부피로 사용합니다.
계산기
연속 희석 계산기는 각 튜브의 농도와 옮길 양, 넣을 양을 보여 줍니다. 한 번의 희석은 희석 계산기, 희석 전에 세포를 세려면 혈구계산판 계산기를 쓰세요.