So machst du eine Verdünnungsreihe

Was eine Verdünnungsreihe ist

Bei einer Verdünnungsreihe wird jedes Röhrchen aus dem vorherigen hergestellt. So erreichst du sehr starke Verdünnungen, etwa eins zu einer Million, mit Volumina, die sich gut pipettieren lassen, und erhältst gleichmäßig abgestufte Konzentrationen für Standardkurven und Keimzahlbestimmungen.

So machst du eine 1:10-Verdünnungsreihe

1. Beschrifte die Röhrchen und gib in jedes 900 µL Verdünnungsmittel (Wasser, Puffer oder Medium).
2. Gib 100 µL der Probe ins erste Röhrchen und mische gut durch Auf- und Abpipettieren oder auf dem Vortexer. Dieses Röhrchen ist eine 1:10-Verdünnung (10⁻¹).
3. Überführe mit einer neuen Spitze 100 µL vom ersten ins zweite Röhrchen und mische. Das ist 10⁻².
4. Wiederhole das entlang der Reihe. Jedes Röhrchen ist zehnmal schwächer als das vorherige.

Für eine 1:2-Reihe, etwa für Standardkurven und Antikörpertitrationen, mischst du gleiche Volumina, zum Beispiel 500 µL aus dem vorherigen Röhrchen in 500 µL Verdünnungsmittel.

Die Gesamtverdünnung berechnen

Der Verdünnungsfaktor eines Schritts ist Gesamtvolumen ÷ übertragenes Volumen: (100 + 900) ÷ 100 = 10. Die Gesamtverdünnung eines Röhrchens ist das Produkt der Faktoren aller Schritte; das sechste Röhrchen einer 1:10-Reihe ist also 10⁶-fach verdünnt. Seine Konzentration ist die Ausgangskonzentration ÷ 10⁶.

Kolonien aus einer Verdünnung zählen

Plattiere ein bekanntes Volumen aus einigen Röhrchen aus und zähle die Platte mit 30 bis 300 Kolonien. Dann gilt:

KBE pro mL = Kolonien × Gesamtverdünnung ÷ ausplattiertes Volumen (mL)

45 Kolonien aus 0,1 mL des 10⁻⁶-Röhrchens ergeben 45 × 10⁶ ÷ 0,1 = 4,5 × 10⁸ KBE/mL in der Ausgangsprobe.

Tipps für genaue Verdünnungen

• Wechsle zwischen den Röhrchen die Spitze; verschleppte Flüssigkeit erzeugt einen Fehler, der entlang der Reihe wächst.
• Mische jedes Röhrchen gründlich, bevor du weiter überträgst.
• Pipettiere Volumina im mittleren Bereich der Pipette, nicht an ihrer kleinsten Einstellung.

Rechner

Der Verdünnungsreihen-Rechner zeigt die Konzentration jedes Röhrchens und wie viel du überträgst und zugibst. Für eine einzelne Verdünnung nimmst du den Verdünnungsrechner, zum Zählen der Zellen vor dem Verdünnen den Zählkammer-Rechner.