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Cómo hacer una dilución seriada

Qué es una dilución seriada

Una dilución seriada es una cadena de diluciones en la que cada tubo se prepara a partir del anterior. Permite llegar a diluciones muy grandes, como una entre un millón, con volúmenes fáciles de pipetear, y da una serie de concentraciones espaciadas por igual para curvas estándar y recuentos en placa.

Cómo hacer una dilución seriada 1:10

  1. Rotula los tubos y añade 900 µL de diluyente (agua, tampón o medio) a cada uno.
  2. Añade 100 µL de la muestra al primer tubo y mezcla bien pipeteando o con el vórtex. Este tubo es una dilución 1:10 (10−1).
  3. Con una punta nueva, pasa 100 µL del primer tubo al segundo y mezcla. Es 10−2.
  4. Repite a lo largo de la fila. Cada tubo es diez veces más diluido que el anterior.

Para una serie de diluciones 1:2, usada en curvas estándar y titulaciones de anticuerpos, mezcla volúmenes iguales, por ejemplo 500 µL del tubo anterior en 500 µL de diluyente.

Cómo calcular la dilución total

El factor de dilución de un paso es volumen total ÷ volumen transferido: (100 + 900) ÷ 100 = 10. La dilución total de un tubo es el producto de los factores de cada paso, así que el sexto tubo de una serie 1:10 está diluido 106 veces. Su concentración es la inicial ÷ 106.

Recuento de colonias a partir de una dilución

Siembra un volumen conocido de varios tubos y cuenta la placa que tenga entre 30 y 300 colonias. Entonces:

UFC por mL = colonias × dilución total ÷ volumen sembrado (mL)

45 colonias de 0,1 mL del tubo 10−6 dan 45 × 106 ÷ 0,1 = 4,5 × 108 UFC/mL en la muestra original.

Consejos para diluir con precisión

  • Cambia de punta entre tubos; el líquido arrastrado añade un error que crece a lo largo de la serie.
  • Mezcla bien cada tubo antes de la siguiente transferencia.
  • Pipetea volúmenes en la mitad del rango de la pipeta, no en su valor mínimo.

Calculadoras

La calculadora de diluciones seriadas muestra la concentración de cada tubo y cuánto transferir y añadir. Para una sola dilución, usa la calculadora de diluciones; para contar células antes de diluir, la calculadora de hemocitómetro.

Herramientas de esta guía

Calculadora de diluciones seriadasCalculadora de dilucionesCalculadora de hemocitómetro

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