सीरियल डाइल्यूशन कैसे करें

सीरियल डाइल्यूशन क्या है

सीरियल डाइल्यूशन तनुकरणों की एक श्रृंखला है, जिसमें हर ट्यूब पिछली ट्यूब से बनती है। इससे दस लाख में एक जैसे बहुत बड़े तनुकरण भी आसानी से पिपेट होने वाले आयतनों से हो जाते हैं, और स्टैंडर्ड कर्व व प्लेट गिनती के लिए बराबर अंतर वाली सांद्रताओं की श्रृंखला मिलती है।

1:10 सीरियल डाइल्यूशन कैसे करें

1. ट्यूबों पर लेबल लगाएँ और हर ट्यूब में 900 µL डाइल्यूएंट (पानी, बफ़र या माध्यम) डालें।
2. पहली ट्यूब में 100 µL नमूना डालें और पिपेटिंग या वॉर्टेक्स से अच्छी तरह मिलाएँ। यह ट्यूब 1:10 (10⁻¹) तनुकरण है।
3. नई टिप से पहली ट्यूब से 100 µL दूसरी में डालें और मिलाएँ। यह 10⁻² है।
4. पूरी पंक्ति में यही दोहराएँ। हर ट्यूब पिछली से दस गुना पतली होती है।

स्टैंडर्ड कर्व और एंटीबॉडी टाइट्रेशन में इस्तेमाल होने वाली 1:2 श्रृंखला के लिए बराबर आयतन मिलाएँ, जैसे पिछली ट्यूब का 500 µL, 500 µL डाइल्यूएंट में।

कुल तनुकरण कैसे निकालें

एक चरण का तनुकरण गुणांक कुल आयतन ÷ स्थानांतरित आयतन है: (100 + 900) ÷ 100 = 10। किसी ट्यूब का कुल तनुकरण सभी चरणों के गुणांकों का गुणनफल है, इसलिए 1:10 श्रृंखला की छठी ट्यूब 10⁶ गुना पतली है। उसकी सांद्रता शुरुआती सांद्रता ÷ 10⁶ है।

तनुकरण से कॉलोनियाँ गिनना

कुछ ट्यूबों से ज्ञात आयतन प्लेट पर फैलाएँ और 30 से 300 कॉलोनियों वाली प्लेट गिनें। फिर:

प्रति mL CFU = कॉलोनियाँ × कुल तनुकरण ÷ फैलाया गया आयतन (mL)

10⁻⁶ ट्यूब के 0.1 mL से 45 कॉलोनियाँ मिलें तो 45 × 10⁶ ÷ 0.1 = मूल नमूने में 4.5 × 10⁸ CFU/mL।

सटीक तनुकरण के सुझाव

• हर ट्यूब के बीच टिप बदलें; साथ आया द्रव ऐसी त्रुटि जोड़ता है जो श्रृंखला में आगे बढ़ती जाती है।
• अगला स्थानांतरण करने से पहले हर ट्यूब को अच्छी तरह मिलाएँ।
• पिपेट की सबसे छोटी सेटिंग के बजाय उसकी सीमा के बीच के आयतन लें।

कैलकुलेटर

सीरियल डाइल्यूशन कैलकुलेटर हर ट्यूब की सांद्रता और कितना स्थानांतरित करना व मिलाना है, यह बताता है। एक बार के तनुकरण के लिए डाइल्यूशन कैलकुलेटर और तनुकरण से पहले कोशिकाएँ गिनने के लिए हीमोसाइटोमीटर कैलकुलेटर इस्तेमाल करें।