Was MOI bedeutet
Die Multiplizität der Infektion (MOI) ist die Zahl infektiöser Viruspartikel pro Zelle. Eine MOI von 5 auf 200.000 Zellen bedeutet, 1.000.000 infektiöse Einheiten zuzugeben.
Die Formel
Virusvolumen (mL) = MOI × Zellzahl ÷ Titer (infektiöse Einheiten pro mL)
Für 200.000 Zellen bei MOI 5 und einem Titer von 1 × 108 pro mL: 5 × 200.000 ÷ 108 = 0,01 mL = 10 µL.
Zähle die Zellen am Tag der Infektion, da sie sich nach dem Aussäen weiter teilen, und nimm einen Titer, der so gemessen wurde, wie das Virus infiziert (PFU bei plaquebildenden Viren, transduzierende Einheiten bei Lentiviren). Physikalische Titer wie Genomkopien oder p24 zählen auch nicht infektiöse Partikel mit und überschätzen die infektiöse Dosis.
Wie viele Zellen infiziert werden
Viruspartikel treffen die Zellen zufällig, nach der Poisson-Verteilung. Der Anteil mindestens einmal infizierter Zellen ist 1 − e−MOI:
- MOI 0,1: etwa 10 % der Zellen
- MOI 1: etwa 63 %
- MOI 3: etwa 95 %
- MOI 5: etwa 99 %
Eine MOI von 1 infiziert also nicht jede Zelle; fast alle erreichst du erst mit einer MOI von 3 bis 5.
Welche MOI du nimmst
- Um fast jede Zelle zu infizieren, etwa für eine One-Step-Wachstumskurve: MOI 3 bis 10.
- Für gepoolte Library-Screens, bei denen jede Zelle ein Konstrukt tragen soll: etwa 0,3. Dann wird nur etwa ein Viertel der Zellen infiziert, aber rund 86 % davon erhalten genau eine Kopie.
- Für Multi-Step-Wachstumskurven, bei denen sich das Virus in der Kultur ausbreitet: 0,01 bis 0,1.
Rechner
Der MOI-Rechner liefert das Virusvolumen für eine MOI oder die MOI für ein Volumen, mit dem erwarteten Anteil infizierter Zellen. Zum Zählen der Zellen vorher nimmst du den Zählkammer-Rechner.