Zellen mit einer Zählkammer zählen

Zählen

1. Die Zellen mit Trypanblau mischen, oft 1:1. Es färbt tote Zellen blau.
2. Etwa 10 µL unter das Deckglas geben.
3. Die ungefärbten Zellen in den vier großen Eckquadraten zählen. Zellen auf der oberen und linken Linie mitzählen, auf der unteren und rechten nicht, damit keine doppelt gezählt wird.
4. Die blauen Zellen getrennt zählen, wenn man die Viabilität braucht.

Die Formel

Jedes große Quadrat misst 1 mm × 1 mm bei 0,1 mm Tiefe, das sind 0,1 µL oder 10⁻⁴ mL. Also:

Zellen pro mL = Mittelwert pro Quadrat × Verdünnungsfaktor × 10⁴

Zählungen von 50, 46, 52 und 48 ergeben im Mittel 49. Bei 1:1 mit Trypanblau (Faktor 2): 49 × 2 × 10⁴ = 9,8 × 10⁵ Zellen/mL.

Die Viabilität ist die Zahl lebender Zellen geteilt durch alle Zellen, mal 100.

Rechenbeispiele

• Ohne Verdünnung: Zählungen von 120, 132, 118 und 126 ergeben im Mittel 124. Zellen pro mL = 124 × 1 × 10⁴ = 1,24 × 10⁶ Zellen/mL.
• Trypanblau 1:1, mit toten Zellen: lebende Zellen im Mittel 62, tote 8. Lebende Zellen pro mL = 62 × 2 × 10⁴ = 1,24 × 10⁶ Zellen/mL; Viabilität = 62 ÷ (62 + 8) = 89 %.
• Zu dicht, vorher 1:10 verdünnt: im Mittel 45 nach 1:10-Verdünnung und dann 1:1 mit Trypanblau (Gesamtfaktor 20). Zellen pro mL = 45 × 20 × 10⁴ = 9 × 10⁶ Zellen/mL in der ursprünglichen Suspension.
• Gesamtzellzahl und Aussaatvolumen: 1,24 × 10⁶ Zellen/mL in 10 mL sind 1,24 × 10⁷ Zellen. Für 5 × 10⁵ Zellen braucht es 5 × 10⁵ ÷ 1,24 × 10⁶ = 0,40 mL.

Der richtige Verdünnungsfaktor

Der Verdünnungsfaktor ist das Gesamtvolumen geteilt durch das Volumen der Zellsuspension darin. Zellen und Trypanblau zu gleichen Teilen ergibt 2; 100 µL Zellen in 900 µL Medium ergibt 10; beides zusammen 20. Weniger als etwa 20 oder mehr als etwa 200 Zellen pro Quadrat ergeben schlechte Schätzungen: dichte Suspensionen verdünnen, bei dünnen mehr Quadrate zählen.

Verdopplungszeit

Aus zwei Zählungen: Verdopplungszeit = Zeit × ln 2 ÷ ln(N₂ ÷ N₁). Zellen, die in 48 Stunden von 1 × 10⁵ auf 8 × 10⁵ wachsen, haben sich dreimal verdoppelt, alle 16 Stunden.

Rechner

Der Zählkammer-Rechner gibt Zellen pro mL, Viabilität und das Volumen zum Aussäen einer gewünschten Zellzahl an. Der Rechner für die Verdopplungszeit berechnet Verdopplungszeit und Wachstumsrate.