Comment compter des cellules avec un hématimètre

Le comptage

1. Mélangez les cellules avec du bleu trypan, souvent à 1:1 ; il colore en bleu les cellules mortes.
2. Déposez environ 10 µL sous la lamelle.
3. Comptez les cellules non colorées dans les quatre grands carrés des coins d’une cellule de Neubauer. Comptez celles qui touchent les lignes du haut et de gauche, mais pas celles du bas et de droite, pour n’en compter aucune deux fois.
4. Comptez à part les cellules bleues si vous voulez la viabilité.

La formule

Chaque grand carré mesure 1 mm × 1 mm sur 0,1 mm de profondeur, soit 0,1 µL, ou 10⁻⁴ mL. Donc :

cellules par mL = moyenne par carré × facteur de dilution × 10⁴

Des comptages de 50, 46, 52 et 48 donnent une moyenne de 49. Avec une dilution à 1:1 dans le bleu trypan (facteur 2) : 49 × 2 × 10⁴ = 9,8 × 10⁵ cellules/mL.

La viabilité est le nombre de cellules vivantes divisé par le total, multiplié par 100.

Exemples chiffrés

• Sans dilution : des comptages de 120, 132, 118 et 126 donnent une moyenne de 124. Cellules par mL = 124 × 1 × 10⁴ = 1,24 × 10⁶ cellules/mL.
• Bleu trypan 1:1, avec cellules mortes : moyenne de 62 vivantes et 8 mortes. Cellules vivantes par mL = 62 × 2 × 10⁴ = 1,24 × 10⁶ cellules/mL ; viabilité = 62 ÷ (62 + 8) = 89 %.
• Trop dense, diluée au 1/10 avant : moyenne de 45 après dilution au 1/10 puis mélange 1:1 avec le bleu trypan (facteur total 20). Cellules par mL = 45 × 20 × 10⁴ = 9 × 10⁶ cellules/mL dans la suspension d'origine.
• Nombre total et volume à ensemencer : 1,24 × 10⁶ cellules/mL dans 10 mL font 1,24 × 10⁷ cellules. Pour ensemencer 5 × 10⁵ cellules, prélevez 5 × 10⁵ ÷ 1,24 × 10⁶ = 0,40 mL.

Ne pas se tromper de facteur de dilution

Le facteur de dilution est le volume total divisé par le volume de suspension cellulaire qu'il contient. Cellules et bleu trypan à parts égales : 2 ; 100 µL de cellules dans 900 µL de milieu : 10 ; les deux à la fois : 20. Compter moins d'une vingtaine ou plus de 200 cellules par carré donne de mauvaises estimations : diluez les suspensions denses et comptez plus de carrés pour les suspensions peu denses.

Le temps de doublement

À partir de deux comptages : temps de doublement = durée × ln 2 ÷ ln(N₂ ÷ N₁). Des cellules qui passent de 1 × 10⁵ à 8 × 10⁵ en 48 heures ont doublé trois fois, soit toutes les 16 heures.

Les outils

Le Calcul avec hématimètre donne les cellules par mL, la viabilité et le volume à ensemencer pour un nombre de cellules visé. Le Calcul du temps de doublement donne le temps de doublement et le taux de croissance.