Comment compter des cellules avec un hématimètre

Le comptage

1. Mélangez les cellules avec du bleu trypan, souvent à 1:1 ; il colore en bleu les cellules mortes.
2. Déposez environ 10 µL sous la lamelle.
3. Comptez les cellules non colorées dans les quatre grands carrés des coins d’une cellule de Neubauer. Comptez celles qui touchent les lignes du haut et de gauche, mais pas celles du bas et de droite, pour n’en compter aucune deux fois.
4. Comptez à part les cellules bleues si vous voulez la viabilité.

La formule

Chaque grand carré mesure 1 mm × 1 mm sur 0,1 mm de profondeur, soit 0,1 µL, ou 10⁻⁴ mL. Donc :

cellules par mL = moyenne par carré × facteur de dilution × 10⁴

Des comptages de 50, 46, 52 et 48 donnent une moyenne de 49. Avec une dilution à 1:1 dans le bleu trypan (facteur 2) : 49 × 2 × 10⁴ = 9,8 × 10⁵ cellules/mL.

La viabilité est le nombre de cellules vivantes divisé par le total, multiplié par 100.

Le temps de doublement

À partir de deux comptages : temps de doublement = durée × ln 2 ÷ ln(N₂ ÷ N₁). Des cellules qui passent de 1 × 10⁵ à 8 × 10⁵ en 48 heures ont doublé trois fois, soit toutes les 16 heures.

Les outils

Le Calcul avec hématimètre donne les cellules par mL, la viabilité et le volume à ensemencer pour un nombre de cellules visé. Le Calcul du temps de doublement donne le temps de doublement et le taux de croissance.