كيف تعدّ الخلايا بعدّاد الكريات

العدّ

1. امزج الخلايا مع أزرق التريبان، غالبًا بنسبة 1:1، الذي يصبغ الخلايا الميتة بالأزرق.
2. حمّل نحو 10 µL تحت الساترة.
3. عدّ الخلايا غير المصبوغة في المربعات الأربعة الكبيرة في الزوايا. عدّ التي تلمس الخطين العلوي والأيسر لا السفلي والأيمن، حتى لا تعدّ أي خلية مرتين.
4. عدّ الخلايا الزرقاء منفصلة إن أردت الحيوية.

الصيغة

كل مربع كبير مقاسه 1 mm × 1 mm وعمقه 0.1 mm، أي 0.1 µL، أو 10⁻⁴ mL. لذلك:

الخلايا لكل mL = المتوسط لكل مربع × معامل التخفيف × 10⁴

عدّات 50 و46 و52 و48 تعطي متوسط 49. ومع تخفيف 1:1 في أزرق التريبان (معامل 2): ‏49 × 2 × 10⁴ = 9.8 × 10⁵ خلية/mL.

الحيوية هي عدد الخلايا الحية مقسومًا على العدد الكلي، مضروبًا في 100.

أمثلة محلولة

• دون تخفيف: عدّات 120 و132 و118 و126 تعطي متوسط 124. الخلايا لكل mL = 124 × 1 × 10⁴ = 1.24 × 10⁶ خلية/mL.
• أزرق التريبان 1:1، مع خلايا ميتة: متوسط الحية 62 والميتة 8. الخلايا الحية لكل mL = 62 × 2 × 10⁴ = 1.24 × 10⁶ خلية/mL؛ والحيوية = 62 ÷ (62 + 8) = 89%.
• كثيفة جدًا، خُففت 1:10 أولًا: المتوسط 45 بعد التخفيف 1:10 والمزج 1:1 مع أزرق التريبان (المعامل الكلي 20). الخلايا لكل mL = 45 × 20 × 10⁴ = 9 × 10⁶ خلية/mL في المعلَّق الأصلي.
• الخلايا الكلية والحجم المطلوب للزرع: ‏1.24 × 10⁶ خلية/mL في 10 mL تساوي 1.24 × 10⁷ خلية. لزرع 5 × 10⁵ خلية، خذ 5 × 10⁵ ÷ 1.24 × 10⁶ = 0.40 mL.

ضبط معامل التخفيف

معامل التخفيف هو الحجم الكلي مقسومًا على حجم معلَّق الخلايا الذي يحتويه. أجزاء متساوية من الخلايا وأزرق التريبان تعطي 2؛ و100 µL من الخلايا في 900 µL من الوسط تعطي 10؛ وفعل الأمرين يعطي 20. عدّ أقل من نحو 20 خلية أو أكثر من نحو 200 لكل مربع يعطي تقديرات سيئة، فخفّف المعلقات الكثيفة وعدّ مربعات أكثر في الخفيفة.

زمن التضاعف

من عدّين: زمن التضاعف = الزمن × ln 2 ÷ ln(N₂ ÷ N₁). خلايا تنتقل من 1 × 10⁵ إلى 8 × 10⁵ في 48 ساعة تضاعفت ثلاث مرات، مرة كل 16 ساعة.

الحاسبات

تعطي حاسبة عدّاد الكريات الخلايا لكل mL والحيوية والحجم المطلوب لزرع عدد محدد من الخلايا. وتحسب حاسبة زمن تضاعف الخلايا زمن التضاعف ومعدل النمو.