كيف تحضّر هلام الأغاروز

اختيار النسبة

تحدد النسبة حجم DNA الذي يفصله الهلام أفضل. النسب المنخفضة تترك مسامات كبيرة للقطع الكبيرة؛ والعالية تفصل الصغيرة.

• 0.7%: نحو 0.8 إلى 12 kb
• 1%: نحو 0.5 إلى 10 kb، المعتاد لنواتج PCR والبلازميدات
• 1.5%: نحو 0.2 إلى 3 kb
• 2%: نحو 50 bp إلى 2 kb

حساب الكميات

نسبة الهلام هي غرامات الأغاروز لكل 100 mL من المحلول المنظِّم: الغرامات = % × الحجم (mL) ÷ 100. هلام 50 mL بنسبة 1% يحتاج 0.5 g. حضّر المحلول المنظِّم بتركيز 1× من مخزون: 1 mL من TAE ‏50× لكل 50 mL، أو 5 mL من TBE ‏10×. استخدم المحلول المنظِّم نفسه في الحوض.

صب الهلام

1. زِن الأغاروز في دورق وأضف المحلول المنظِّم 1×.
2. سخّنه في الميكروويف على فترات قصيرة، مع الرج بينها، حتى يصبح المحلول شفافًا تمامًا دون حبيبات طافية. راقبه: قد يغلي فجأة.
3. اتركه يبرد إلى نحو 50 إلى 60 °C، بما يكفي لإمساك الدورق.
4. أضف صبغة DNA إن كنت تصبغ في الهلام، ورجّ واسكبه في الصينية مع وضع المشط.
5. اتركه يتصلب من 20 إلى 30 دقيقة وانزع المشط بحذر.

تشغيله

ضع الهلام في الحوض مع الآبار بجانب القطب السالب (الأسود)، لأن DNA يتحرك نحو الموجب (الأحمر)، وغطّه بالمحلول المنظِّم. حمّل العينات ممزوجة بمحلول التحميل بجانب سلّم DNA وشغّله بنحو 5 إلى 8 فولت لكل cm بين القطبين حتى تقطع جبهة الصبغة ثلثي الهلام.

الحاسبات

تعطي حاسبة هلام الأغاروز الأغاروز والمحلول المنظِّم والماء والصبغة لأي نسبة وحجم. ولتحميل كمية ثابتة من DNA، قِسه أولًا بـ حاسبة تركيز DNA.