كيف تحسب كثافة زرع الخلايا

كثافة الزرع تُحسب لكل مساحة

تُزرع الخلايا الملتصقة عادةً بكثافة بالخلايا لكل cm² من سطح الزراعة، كي تعطي الكثافة نفسها التغطية نفسها في أي وعاء. المساحات المعتادة:

• طبق 96 بئرًا: 0.32 cm² للبئر
• طبق 24 بئرًا: 1.9 cm² للبئر
• طبق 12 بئرًا: 3.8 cm² للبئر
• طبق 6 آبار: 9.5 cm² للبئر
• قوارير T25 وT75 وT175: ‏25 و75 و175 cm²

راجع ورقة بيانات الشركة المصنّعة؛ فالمساحات تختلف قليلًا بين العلامات التجارية.

ثلاث خطوات

1. الخلايا لكل وعاء = الكثافة × المساحة. بكثافة 20,000 خلية/cm² في طبق 6 آبار: 20,000 × 9.5 = 190,000 خلية لكل بئر.
2. إجمالي الخلايا = الخلايا لكل وعاء × عدد الأوعية، زائد 10% لفاقد السحب بالماصة. ست آبار: 190,000 × 6 × 1.1 = 1,254,000 خلية.
3. حجم المعلّق = إجمالي الخلايا ÷ عدّك بالخلايا/mL. مع 1,000,000 خلية/mL في شريحة نويباور: 1.25 mL، يُكمَّل بالوسط حتى الحجم الكلي الذي تحتاجه (6 × 2 mL = 12 mL، زائد 10%).

اختيار الكثافة

تعتمد الكثافة على خط الخلايا وعلى متى تريد استخدام الخلايا. للوصول إلى التقاء محدد في يوم معيّن، احسب رجوعًا باستخدام زمن التضاعف: تتضاعف الخلايا مرة كل زمن تضاعف حين تتعافى من التمرير، عادةً بعد يوم. خط يتضاعف كل 24 ساعة ويُزرع بتغطية 25% يصبح ملتقيًا تقريبًا خلال يومين أو ثلاثة. وتعطي أوراق بيانات المورّد والبروتوكولات المنشورة كثافة بدئية لمعظم الخطوط.

الحصول على طبقة متجانسة

اخلط المعلّق قبيل كل نقل مباشرة، لأن الخلايا تترسب خلال دقيقة أو دقيقتين. وبعد الزرع، حرّك الأطباق على شكل صليب (أمامًا وخلفًا، يمينًا ويسارًا) بدلًا من الدوائر التي تدفع الخلايا إلى حافة البئر، واتركها تستقر من 15 إلى 30 دقيقة قبل نقلها إلى الحاضنة.

الأدوات

عُدّ الخلايا بـ حاسبة عدّاد الكريات، ثم أدخل العدد والكثافة في حاسبة زرع الخلايا لتحصل على أحجام المعلّق والوسط للأطباق والقوارير. وتستخرج حاسبة زمن تضاعف الخلايا هذا الزمن من عدّين.