Hücre ekim yoğunluğu nasıl hesaplanır

Ekim yoğunluğu alan başınadır

Yapışan hücreler genellikle büyüme alanının cm²’si başına hücre cinsinden bir yoğunlukta ekilir; böylece aynı yoğunluk her kapta aynı kaplamayı verir. Tipik büyüme alanları:

• 96 kuyucuklu plaka: kuyucuk başına 0,32 cm²
• 24 kuyucuklu plaka: kuyucuk başına 1,9 cm²
• 12 kuyucuklu plaka: kuyucuk başına 3,8 cm²
• 6 kuyucuklu plaka: kuyucuk başına 9,5 cm²
• T25, T75 ve T175 flasklar: 25, 75 ve 175 cm²

Üreticinin veri sayfasını kontrol et; alanlar markalar arasında hafifçe değişir.

Üç adım

1. Kap başına gereken hücre = yoğunluk × alan. 6 kuyucuklu plakada 20.000 hücre/cm²’de: 20.000 × 9,5 = kuyucuk başına 190.000 hücre.
2. Toplam hücre = kap başına hücre × kap sayısı, artı pipetleme kayıpları için yaklaşık %10. Altı kuyucuk: 190.000 × 6 × 1,1 = 1.254.000 hücre.
3. Süspansiyon hacmi = toplam hücre ÷ hücre/mL cinsinden sayımın. Hemositometreden 1.000.000 hücre/mL ile: 1,25 mL; ihtiyacın olan toplam hacme (6 × 2 mL = 12 mL, artı %10) besiyeriyle tamamlanır.

Yoğunluğu seçmek

Yoğunluk hücre hattına ve hücreleri ne zaman kullanmak istediğine bağlıdır. Belirli bir günde hedef bir konfluense ulaşmak için ikilenme süresinden geriye çalış: hücreler pasajdan sonra, genellikle yaklaşık bir gün içinde toparlandıklarında her ikilenme süresinde bir kez ikilenir. %25 kaplamayla ekilen, 24 saatte bir ikilenen bir hat iki ila üç gün sonra konfluense yakındır. Tedarikçi veri sayfaları ve yayımlanmış protokoller çoğu hat için bir başlangıç yoğunluğu verir.

Düzgün bir tabaka elde etmek

Hücreler bir iki dakika içinde dibe çöktüğü için süspansiyonu her aktarımdan hemen önce karıştır. Ektikten sonra plakaları, hücreleri her kuyucuğun kenarına iten çevirme hareketi yerine çapraz bir düzende (ileri-geri, sola-sağa) hareket ettir ve inkübatöre taşımadan önce 15 ila 30 dakika çökmelerini bekle.

Araçlar

Hücreleri Hemositometre hesaplayıcı ile say, sonra plakalar ve flasklar için süspansiyon ve besiyeri hacimlerini almak üzere sayımı ve yoğunluğu Hücre ekim hesaplayıcıya gir. Hücre ikilenme süresi hesaplayıcı ikilenme süresini iki sayımdan hesaplar.