Formül
İkilenme süresi, büyüyen bir popülasyonun iki katına çıkması için geçen süredir. Başlangıçtaki N1 sayımı ve t süresi sonraki N2 sayımından:
ikilenme süresi = t × ln 2 ÷ ln(N2 ÷ N1)
ln doğal logaritmadır ve ln 2, 0,693’tür. Aynı formül hemositometrede sayılan hücreler, OD600 ile ölçülen bakteriler ya da üstel büyüyen her popülasyon için işler.
Çözümlü bir örnek
2 × 105 hücreyle ekilen bir flaskta 72 saat sonra 1,6 × 106 hücre var.
- N2 ÷ N1 = 1,6 × 106 ÷ 2 × 105 = 8.
- ln 8 = 2,079.
- İkilenme süresi = 72 × 0,693 ÷ 2,079 = 24 saat.
Daha hızlı bir kontrol: 8, 23’tür; yani hücreler 72 saatte üç kez, her 24 saatte bir ikilenmiş.
Büyüme hızı ve nesil süresi
Büyüme hızı sabiti k = ln(N2 ÷ N1) ÷ t’dir; burada 2,079 ÷ 72 = saatte 0,0289 ve ikilenme süresi ln 2 ÷ k’dir. Mikrobiyologlar bakterilerin ikilenme süresine nesil süresi der; aynı sayıdır.
Tipik değerler
- 37 °C’de zengin besiyerinde E. coli: yaklaşık 20 dakika.
- Maya: 90 dakika ila 2 saat.
- HeLa, HEK293 ve CHO hücreleri: 20 ila 24 saat.
- Primer hücreler ve yavaş hatlar: 30 ila 60 saat ya da daha fazla.
Güvenilir bir sayı elde etmek
Yalnızca hücreler log fazındayken say. Yeni ekilen hücreler bölünmeye başlamadan önce bekler; konfluense yakın ya da tükenmiş besiyerindeki hücreler de yavaşlar ve ikisi de görünen ikilenme süresini uzatır. En az iki ikilenme arayla alınmış sayımlar kullan, her seferinde aynı şekilde say ve yapışan hücrelerde yalnızca canlı, tutunmuş hücreleri say. Ekim yoğunluğu ve pasaj numarası sonucu değiştirir; bu yüzden raporlarken onları not et.
Hesaplayıcılar
Hücre ikilenme süresi hesaplayıcı iki sayımdan ikilenme süresini, büyüme hızını ve ikilenme sayısını verir. Hücreleri Hemositometre hesaplayıcı ile say; bakteriler için OD600 okumalarını OD600 hesaplayıcı ile mL başına hücreye çevir.