IC50 nedir
IC50 (yarı maksimal inhibitör derişim), bir ilacın ya da inhibitörün enzim aktivitesi veya hücre canlılığı gibi bir yanıtı üst ve alt düzeylerinin tam ortasına indiren derişimidir. Derişimle artan bir yanıtta aynı noktaya EC50 denir.
Deneyi tasarlamak
- Eğrinin iki platoda da ve ortasından geçen noktaları olsun diye, üç ya da on kat gibi adımlarla log ölçeğinde eşit aralıklı 8 ila 12 derişim dene.
- Muamele edilmemiş bir kontrol (%100) ve tam inhibisyon ya da arka plan kontrolü (%0) ekle.
- Her derişimi tekrarlı çalış.
Verileri normalize etmek
Her okumayı kontrollerin yüzdesine çevir:
% yanıt = (okuma − arka plan) ÷ (muamelesiz − arka plan) × 100
Eğriyi uydurmak
Doz-yanıt verileri log derişime karşı S biçimli bir eğri oluşturur ve dört parametreli lojistik modelle uydurulur:
yanıt = alt + (üst − alt) ÷ (1 + 10(log IC50 − log derişim) × Hill eğimi)
Uydurma üst ve alt platoları, orta noktadaki IC50’yi ve dikliği tanımlayan Hill eğimini bulur. Verilerin bir platoya ulaşmıyorsa normalize ettikten sonra üstü 100’e ve altı 0’a sabitlemek daha kararlı bir uydurma verir.
Sonucu okumak
- IC50: daha düşük bir değer daha güçlü bir bileşik demektir.
- Hill eğimi: basit bir azalan eğri için yaklaşık −1. Çok daha dik ya da yatık eğimler ikinci bir bakışa değer.
- R² ve grafik: eğri, sistematik bir sapma örüntüsü olmadan noktaların arasından geçmelidir.
- Denenen aralığın dışındaki bir IC50 bir ekstrapolasyondur ve daha fazla derişimle doğrulanmalıdır.
Hesaplayıcılar
IC50 hesaplayıcı dört parametreli eğriyi tekrarlarına uydurur, çizer ve IC50 ya da EC50’yi, Hill eğimini, platoları ve R²’yi verir. Derişimleri Seri seyreltme hesaplayıcı ile planla.