Neden stok kullanılır
Stok çözelti, ihtiyaç duyduğunda seyrelttiğin derişik bir çözeltidir. Her besiyeri partisi için birkaç miligramı doğru tartmak zordur; derişik bir stok için bir kez bir gram tartmak kolaydır ve belirli bir hacimde stok eklemek hızlı ve tekrarlanabilirdir. Derişik stoklar ayrıca daha uzun dayanır ve dondurucuda daha az yer kaplar.
× gösterimi
1000× bir stok, çalışma derişiminden bin kat daha güçlüdür; yani 1:1000 seyreltilir: son çözeltinin mL’si başına 1 µL stok. 10× ve 100× stoklar da aynı şekilde işler.
Çözümlü bir örnek: ampisilin
LB plakaları ampisilini 100 µg/mL’de kullanır.
- 1000× stok: 100 µg/mL × 1000 = 100 mg/mL.
- 10 mL stok için 100 mg/mL × 10 mL = 1 g ampisilini suda çöz ve filtreyle sterilize et.
- 500 mL agar için, agar yaklaşık 50 ila 55 °C’ye soğuduğunda 500 ÷ 1000 = 0,5 mL, yani 500 µL stok ekle.
Yaygın antibiyotik çalışma derişimleri
- Ampisilin ve karbenisilin: 100 µg/mL (suda stok)
- Kanamisin: 50 µg/mL (su)
- Spektinomisin: 50 µg/mL (su)
- Kloramfenikol: 25 µg/mL (etanol)
- Tetrasiklin: 10 µg/mL (etanol, karanlıkta saklanır)
Bunlar yaygın değerlerdir; farklı olduğu yerde kendi protokolüne uy.
Stokları saklamak
Stokları alikotlara böl, adı, derişimi ve tarihi etiketle ve −20 °C’de tut. Aynı tüpü tekrar tekrar dondurmak yerine her seferinde bir alikot çözdür.
Hesaplayıcılar
Stok çözelti hesaplayıcı her × stok için tartılacak kütleyi ve eklenecek hacmi verir. Diğer seyreltmeler için Seyreltme hesaplayıcıyı, molar stoklar için Molarite hesaplayıcıyı kullan.
Yaygın laboratuvar stokları
| Stok | 500 mL için | Notlar |
|---|---|---|
| 1 M Tris, pH 8,0 | 60,6 g Tris baz | Hacme tamamlamadan önce pH’ı HCl ile ayarla |
| 5 M NaCl | 146,1 g | Yavaş çözünür; hafif ısıyla karıştır |
| 0,5 M EDTA, pH 8,0 | 93,1 g disodyum dihidrat | pH yaklaşık 8’e yükseltilene kadar çözünmez |
| %10 SDS | 50 g | Oda sıcaklığında tut; soğukta çözeltiden çıkar |
Çözmek ve sterilize etmek
Son hacmin yaklaşık %80’i kadar su ekle, çöz, gerekirse pH’ı ayarla, sonra çizgiye kadar tamamla. Isıya dayananları otoklavla; antibiyotikleri, enzimleri ve bozunan her şeyi 0,22 µm’lik bir filtre kullanarak filtreyle sterilize et.
Yaygın sorunlar
- Çözünmüyor. EDTA yükseltilmiş bir pH ister ve bazı bileşikler DMSO ya da etanol ister. Büyük bir miktar tartmadan önce çözünürlüğü kontrol et.
- Soğukta sakladıktan sonra kristaller. SDS ve bazı tuzlar 4 °C’de çözeltiden çıkar. Kullanmadan önce şişeyi ısıt ve berraklaşana kadar karıştır; SDS’yi oda sıcaklığında tut.
- Çalışma çözeltisi biraz sapmış. 1 L’ye 1 mL 1000× stok eklemek 1.001 mL yapar. Hassas çalışmalarda eklemek yerine son hacme tamamla.
- Stok gücünü kaybediyor. Çözeltideki ampisilin 4 °C’de haftalar içinde bozunur ve tetrasiklin ışıkla yok olur. Alikotları dondur ve ışığa duyarlı stokları folyo içinde tut.