Зачем нужны стоки
Стоковый раствор — концентрированный раствор, который разводят, когда он нужен. Точно отвесить несколько миллиграммов для каждой партии среды трудно; один раз отвесить грамм для концентрированного стока легко, а добавлять заданный объём стока быстро и воспроизводимо. Концентрированные стоки ещё и дольше хранятся и занимают меньше места в морозилке.
Обозначение ×
Сток 1000× в тысячу раз крепче рабочей концентрации, поэтому его разводят 1:1000: 1 мкл стока на мл конечного раствора. Стоки 10× и 100× работают так же.
Разобранный пример: ампициллин
В чашках с LB ампициллин используют в концентрации 100 мкг/мл.
- Сток 1000×: 100 мкг/мл × 1000 = 100 мг/мл.
- Для 10 мл стока растворите 100 мг/мл × 10 мл = 1 г ампициллина в воде и простерилизуйте фильтрованием.
- На 500 мл агара добавьте 500 ÷ 1000 = 0,5 мл, или 500 мкл, стока, когда агар остынет примерно до 50–55 °C.
Распространённые рабочие концентрации антибиотиков
- Ампициллин и карбенициллин: 100 мкг/мл (стоки в воде)
- Канамицин: 50 мкг/мл (вода)
- Спектиномицин: 50 мкг/мл (вода)
- Хлорамфеникол: 25 мкг/мл (этанол)
- Тетрациклин: 10 мкг/мл (этанол, хранить в темноте)
Это распространённые значения; если ваш протокол говорит иначе, следуйте ему.
Хранение стоков
Разделите стоки на аликвоты, подпишите название, концентрацию и дату и храните при −20 °C. Размораживайте по одной аликвоте, а не замораживайте одну и ту же пробирку снова и снова.
Калькуляторы
Калькулятор стоковых растворов даёт массу для навески и объём для добавления для любого стока ×. Для других разведений используйте Калькулятор разведения, а для молярных стоков — Калькулятор молярности.
Распространённые лабораторные стоки
| Сток | На 500 мл | Примечания |
|---|---|---|
| 1 М трис, pH 8,0 | 60,6 г трис-основания | Доведите pH соляной кислотой до доведения до объёма |
| 5 М NaCl | 146,1 г | Растворяется медленно; перемешивайте при лёгком нагреве |
| 0,5 М ЭДТА, pH 8,0 | 93,1 г динатриевой соли дигидрата | Не растворится, пока pH не поднят примерно до 8 |
| 10% SDS | 50 г | Храните при комнатной температуре; на холоде выпадает в осадок |
Растворение и стерилизация
Налейте около 80% конечного объёма воды, растворите, при необходимости доведите pH, затем доведите до метки. Автоклавируйте то, что выдерживает нагрев; антибиотики, ферменты и всё, что разрушается, стерилизуйте фильтрованием через фильтр 0,22 мкм.
Частые проблемы
- Не растворяется. ЭДТА нужен повышенный pH, а некоторым веществам — ДМСО или этанол. Проверьте растворимость, прежде чем отвешивать большое количество.
- Кристаллы после хранения на холоде. SDS и некоторые соли выпадают при 4 °C. Перед использованием согрейте бутылку и перемешайте до прозрачности, а SDS храните при комнатной температуре.
- Рабочий раствор немного не тот. 1 мл стока 1000× в 1 л даёт 1001 мл. Для точной работы доводите до конечного объёма, а не добавляйте к нему.
- Сток теряет силу. Ампициллин в растворе разрушается за недели при 4 °C, а тетрациклин разрушается светом. Замораживайте аликвоты и храните светочувствительные стоки в фольге.