Как рассчитать MOI для вирусной инфекции

Что означает MOI

Множественность инфекции (MOI) — число инфекционных вирусных частиц, добавленных на одну клетку. MOI 5 на 200 000 клеток означает добавить 1 000 000 инфекционных единиц.

Формула

Объём вируса (мл) = MOI × число клеток ÷ титр (инфекционных единиц на мл)

Для 200 000 клеток при MOI 5 с титром 1 × 10⁸ на мл: 5 × 200 000 ÷ 10⁸ = 0,01 мл = 10 мкл.

Считайте клетки в день заражения, потому что после посева они продолжают делиться, и используйте титр, измеренный по способу заражения вируса (БОЕ для бляшкообразующих вирусов, трансдуцирующие единицы для лентивирусов). Физические титры, например копии генома или p24, учитывают и неинфекционные частицы и завышают инфекционную дозу.

Сколько клеток заразится

Вирусные частицы попадают на клетки случайно, что описывается распределением Пуассона. Доля клеток, заражённых хотя бы раз, равна 1 − e^−MOI:

• MOI 0,1: около 10% клеток
• MOI 1: около 63%
• MOI 3: около 95%
• MOI 5: около 99%

Так что MOI 1 заражает не все клетки; чтобы охватить почти все, нужна MOI 3–5.

Какую MOI выбрать

• Чтобы заразить почти каждую клетку, например для одноступенчатой кривой роста: MOI 3–10.
• Для пулированных скринингов библиотек, где каждая клетка должна нести одну конструкцию: около 0,3 — заражается лишь около четверти клеток, но около 86% из них получают единственную копию.
• Для многоступенчатых кривых роста, где вирус распространяется по культуре: 0,01–0,1.

Калькуляторы

Калькулятор MOI даёт объём вируса для заданной MOI или MOI для заданного объёма вместе с ожидаемой долей заражённых клеток. Чтобы сначала посчитать клетки, используйте Калькулятор камеры Горяева.