Kepadatan penanaman dihitung per luas
Sel adheren biasanya ditanam pada kepadatan sel per cm² luas tumbuh, sehingga kepadatan yang sama memberi tutupan yang sama di wadah apa pun. Luas yang umum:
- Pelat 96 sumur: 0,32 cm² per sumur
- Pelat 24 sumur: 1,9 cm² per sumur
- Pelat 12 sumur: 3,8 cm² per sumur
- Pelat 6 sumur: 9,5 cm² per sumur
- Flask T25, T75, dan T175: 25, 75, dan 175 cm²
Periksa lembar data produsen; luasnya sedikit berbeda antarmerek.
Tiga langkah
- Sel per wadah = kepadatan × luas. Pada 20.000 sel/cm² di pelat 6 sumur: 20.000 × 9,5 = 190.000 sel per sumur.
- Total sel = sel per wadah × jumlah wadah, ditambah sekitar 10% untuk kehilangan saat memipet. Enam sumur: 190.000 × 6 × 1,1 = 1.254.000 sel.
- Volume suspensi = total sel ÷ hasil hitung Anda dalam sel/mL. Dengan 1.000.000 sel/mL dari hemositometer: 1,25 mL, ditambah medium sampai volume total yang dibutuhkan (6 × 2 mL = 12 mL, ditambah 10%).
Memilih kepadatan
Kepadatan bergantung pada lini sel dan kapan sel akan dipakai. Untuk mencapai konfluensi tertentu pada hari tertentu, hitung mundur dengan waktu penggandaan: setelah pulih dari pasase, biasanya setelah sekitar sehari, sel menggandakan diri sekali setiap waktu penggandaan. Lini yang menggandakan diri tiap 24 jam dan ditanam pada tutupan 25% hampir konfluen setelah dua sampai tiga hari. Lembar data pemasok dan protokol yang diterbitkan memberi kepadatan awal untuk sebagian besar lini.
Lapisan yang merata
Campur suspensi tepat sebelum setiap pemindahan, karena sel mengendap dalam satu atau dua menit. Setelah menanam, gerakkan pelat dengan pola silang (maju-mundur, kiri-kanan), bukan memutar yang mendorong sel ke tepi sumur, dan biarkan mengendap 15 sampai 30 menit sebelum dimasukkan ke inkubator.
Alat
Hitung sel dengan Kalkulator Hemositometer, lalu masukkan hasil hitung dan kepadatan ke Kalkulator Penanaman Sel untuk mendapat volume suspensi dan medium untuk pelat dan flask. Kalkulator Waktu Penggandaan Sel menghitungnya dari dua kali hitung.