Cara Menghitung Sel dengan Hemositometer

Menghitung

1. Campur sel dengan tripan biru, sering 1:1, yang mewarnai sel mati menjadi biru.
2. Masukkan sekitar 10 µL di bawah kaca penutup.
3. Hitung sel yang tidak berwarna di empat kotak besar di sudut. Hitung sel yang menyentuh garis atas dan kiri, tetapi tidak yang menyentuh garis bawah dan kanan, agar tidak ada yang terhitung dua kali.
4. Hitung sel biru secara terpisah bila Anda ingin tahu viabilitasnya.

Rumusnya

Setiap kotak besar berukuran 1 mm × 1 mm dengan kedalaman 0,1 mm, yaitu 0,1 µL atau 10⁻⁴ mL. Jadi:

sel per mL = rata-rata per kotak × faktor pengenceran × 10⁴

Hitungan 50, 46, 52, dan 48 rata-ratanya 49. Dengan pengenceran tripan biru 1:1 (faktor 2): 49 × 2 × 10⁴ = 9,8 × 10⁵ sel/mL.

Viabilitas adalah jumlah sel hidup dibagi seluruh sel, dikali 100.

Contoh perhitungan

• Tanpa pengenceran: hitungan 120, 132, 118, dan 126 rata-ratanya 124. Sel per mL = 124 × 1 × 10⁴ = 1,24 × 10⁶ sel/mL.
• Tripan biru 1:1, dengan sel mati: rata-rata sel hidup 62, sel mati 8. Sel hidup per mL = 62 × 2 × 10⁴ = 1,24 × 10⁶ sel/mL; viabilitas = 62 ÷ (62 + 8) = 89%.
• Terlalu padat, diencerkan 1:10 dulu: rata-rata 45 setelah pengenceran 1:10 lalu dicampur 1:1 dengan tripan biru (faktor total 20). Sel per mL = 45 × 20 × 10⁴ = 9 × 10⁶ sel/mL dalam suspensi asal.
• Total sel dan volume untuk ditanam: 1,24 × 10⁶ sel/mL dalam 10 mL berarti 1,24 × 10⁷ sel. Untuk menanam 5 × 10⁵ sel, ambil 5 × 10⁵ ÷ 1,24 × 10⁶ = 0,40 mL.

Menentukan faktor pengenceran dengan benar

Faktor pengenceran adalah volume total dibagi volume suspensi sel di dalamnya. Sel dan tripan biru sama banyak berarti 2; 100 µL sel dalam 900 µL medium berarti 10; keduanya sekaligus berarti 20. Menghitung kurang dari sekitar 20 atau lebih dari sekitar 200 sel per kotak memberi perkiraan yang buruk, jadi encerkan suspensi yang padat dan hitung lebih banyak kotak untuk yang jarang.

Waktu penggandaan

Dari dua hitungan: waktu penggandaan = waktu × ln 2 ÷ ln(N₂ ÷ N₁). Sel yang tumbuh dari 1 × 10⁵ menjadi 8 × 10⁵ dalam 48 jam telah berlipat ganda tiga kali, setiap 16 jam.

Kalkulator

Kalkulator Hemositometer memberikan sel per mL, viabilitas, dan volume untuk ditanam demi jumlah sel tertentu. Kalkulator Waktu Penggandaan Sel menghitung waktu penggandaan dan laju pertumbuhan.