Cara Meresuspensi Primer dan Oligo

Rumusnya

Oligo dikirim dalam keadaan kering, dengan jumlah dalam nmol di tabung atau lembar data. Untuk stok dalam µM:

Volume yang ditambahkan (µL) = nmol × 1.000 ÷ konsentrasi (µM)

Untuk stok 100 µM yang umum, cukup nmol × 10: tabung berisi 25,4 nmol perlu 254 µL. Jika lembar data menulis µg, nmol = µg × 1.000 ÷ berat molekul.

Langkah demi langkah

1. Sentrifus singkat tabung yang tertutup agar pelet kering berada di dasar, bukan di tutup.
2. Tambahkan volume hasil hitungan berupa TE rendah EDTA (Tris 10 mM, EDTA 0,1 mM, pH 8) atau air bebas nuklease.
3. Vorteks, diamkan beberapa menit pada suhu ruang, vorteks lagi, lalu sentrifus singkat.

Membuat larutan kerja

PCR biasanya memakai primer 10 µM. Dari stok 100 µM itu berarti pengenceran 1:10: 10 µL stok ditambah 90 µL air atau TE menghasilkan 100 µL dengan konsentrasi 10 µM. Tabung kerja tersendiri menjauhkan stok dari pemipetan berulang.

Air atau TE?

TE menjaga pH tetap stabil, sedangkan air yang sedikit asam dapat merusak DNA perlahan, jadi stok dalam TE lebih tahan lama. Sedikit EDTA dalam TE rendah EDTA tidak mengikat cukup magnesium untuk mengganggu PCR pada pengenceran kerja. Beberapa aplikasi, seperti reaksi sekuensing tertentu, meminta air.

Penyimpanan

Simpan stok pada −20 °C. Bagi menjadi beberapa alikuot agar satu tabung yang terkontaminasi atau terlalu sering dicairkan tidak membuat seluruh pesanan hilang; oligo kering tahan bertahun-tahun, dan stok dalam TE tahan berbulan-bulan dalam keadaan beku.

Kalkulator

Kalkulator resuspensi oligo memberi volume untuk konsentrasi stok berapa pun dan campuran untuk larutan kerja. Statistik primer PCR memberi berat molekul primer, dan kalkulator pengenceran menangani pengenceran lainnya.