세는 방법
- 세포를 트리판 블루와 섞습니다. 대개 1:1이며, 죽은 세포가 파랗게 물듭니다.
- 커버글라스 아래에 약 10 µL를 넣습니다.
- 네 모서리의 큰 칸 네 개에서 물들지 않은 세포를 셉니다. 위쪽과 왼쪽 선에 닿은 세포는 세고, 아래쪽과 오른쪽 선에 닿은 세포는 세지 않아서 두 번 세는 것을 막습니다.
- 생존율이 필요하면 파란 세포도 따로 셉니다.
공식
큰 칸은 1 mm × 1 mm에 깊이 0.1 mm, 즉 0.1 µL, 10−4 mL입니다. 따라서:
mL당 세포 수 = 칸당 평균 × 희석 배수 × 104
센 값이 50, 46, 52, 48이면 평균은 49입니다. 트리판 블루로 1:1 희석했다면(배수 2) 49 × 2 × 104 = 9.8 × 105개/mL입니다.
생존율은 생세포 수를 전체 세포 수로 나눠 100을 곱한 값입니다.
계산 예시
- 희석 없음: 120, 132, 118, 126의 평균은 124. 세포 수/mL = 124 × 1 × 104 = 1.24 × 106 세포/mL.
- 트리판 블루 1:1, 죽은 세포 포함: 살아 있는 세포 평균 62, 죽은 세포 평균 8. 살아 있는 세포 수/mL = 62 × 2 × 104 = 1.24 × 106 세포/mL, 생존율 = 62 ÷ (62 + 8) = 89%.
- 너무 진해서 먼저 1:10 희석: 1:10으로 희석한 뒤 트리판 블루와 1:1로 섞은 후 평균 45 (총 희석 배수 20). 세포 수/mL = 45 × 20 × 104 = 9 × 106 세포/mL (원래 현탁액 기준).
- 총 세포 수와 접종할 부피: 1.24 × 106 세포/mL가 10 mL면 1.24 × 107개. 5 × 105개를 접종하려면 5 × 105 ÷ 1.24 × 106 = 0.40 mL를 취합니다.
희석 배수 제대로 정하기
희석 배수는 전체 부피를 그 안에 든 세포 현탁액의 부피로 나눈 값입니다. 세포와 트리판 블루를 같은 양으로 섞으면 2, 배지 900 µL에 세포 100 µL면 10, 둘 다 하면 20입니다. 한 칸에 약 20개 미만이나 약 200개 초과를 세면 추정이 부정확해지므로, 진한 현탁액은 희석하고 묽은 것은 더 많은 칸을 셉니다.
배가 시간
두 번의 측정으로 구합니다: 배가 시간 = 경과 시간 × ln 2 ÷ ln(N2 ÷ N1). 48시간 동안 1 × 105개에서 8 × 105개로 늘어난 세포는 세 번 배가했으므로 16시간마다 두 배가 된 것입니다.
계산 도구
혈구계산판 계산기는 mL당 세포 수, 생존율, 원하는 세포 수를 분주하는 데 필요한 양을 보여 줍니다. 세포 배가 시간 계산기는 배가 시간과 성장 속도를 구합니다.