표준 곡선의 역할
Bradford, BCA, ELISA, qPCR 같은 많은 분석은 농도가 오르면 측정값도 오르지만, 그 증가량이 일정하게 정해져 있지 않습니다. 농도를 아는 시료(표준)를 함께 재면 그 실험에서 측정값과 농도의 관계를 알 수 있고, 미지 시료를 그 관계에서 읽어 냅니다.
표준 준비
- 예상 범위를 덮는 5~8개의 표준을 블랭크(0)를 포함해 준비합니다.
- 시료와 같은 버퍼로 만들어 버퍼의 영향이 양쪽에 똑같이 미치게 합니다.
- 하나의 스톡에서 희석해 만들고, 시료와 나란히 2~3반복으로 잽니다.
직선 적합
농도에 대해 측정값을 그리고 최소제곱법으로 직선 측정값 = 기울기 × 농도 + 절편을 적합합니다. 각 시료는 다음과 같이 구합니다.
농도 = (측정값 − 절편) ÷ 기울기
측정 전에 시료를 희석했다면 희석 배수를 곱합니다.
계산 예
BSA 표준 0, 250, 500, 1,000 µg/mL의 흡광도가 0.05, 0.37, 0.66, 1.21이라고 합시다. 적합한 직선은 대략 측정값 = 0.00115 × 농도 + 0.068입니다. 5배 희석한 시료가 0.48이면 (0.48 − 0.068) ÷ 0.00115 = 웰 안에서 358 µg/mL, 원래 시료에서는 약 1.8 mg/mL입니다.
곡선 확인
- R²는 0.99 이상이 일반적입니다. 더 낮으면 피펫팅 오차나 이상값을 의심합니다.
- 표준 범위 안에서 쓰세요. 가장 높은 표준보다 위의 측정값은 외삽입니다. 시료를 희석해 다시 잽니다.
- 휘어짐에 주의하세요. 많은 분석은 고농도에서 평평해집니다. 휘는 위쪽 표준을 빼거나 범위를 좁힙니다.
계산기
표준 곡선 계산기는 직선을 적합하고 R²를 구하며, 희석까지 반영해 모든 시료를 계산합니다. 표준 계획은 연속 희석 계산기로, 정제 단백질이면 곡선 대신 A280을 쓰는 단백질 농도 계산기를 쓰세요.