SDS-PAGE 겔 만드는 방법

겔의 원리

SDS는 단백질을 길이에 비례하는 음전하로 덮기 때문에, 전기장 속에서 단백질은 폴리아크릴아마이드 그물을 크기만으로 이동합니다. 겔은 두 층입니다. pH와 농도가 낮은 짧은 농축 겔이 각 시료를 얇은 밴드로 모으고, 그 아래 분리 겔이 단백질을 나눕니다.

농도 고르기

8%: 약 40~200 kDa
10%: 약 20~150 kDa
12%: 약 15~100 kDa, 흔히 쓰는 일반적 선택
15%: 약 10~70 kDa

농축 겔은 보통 4%나 5%입니다.

각 성분의 역할

아크릴아마이드/비스: 겔 그물을 만들며, 농도가 구멍 크기를 정합니다.
Tris-HCl: 분리 겔은 pH 8.8·0.375 M, 농축 겔은 pH 6.8·0.125 M. 이 pH 차이가 시료를 모아 줍니다.
SDS: 0.1%, 단백질을 변성시키고 전하를 띠게 합니다.
APS와 TEMED: 중합을 시작합니다. 몇 분 안에 굳기 시작하므로 마지막에 넣습니다.

겔 붓기

유리판을 조립하고 물로 새는지 확인합니다.
분리 겔을 섞고 APS와 TEMED를 넣어 돌린 뒤, 코움 이가 닿을 곳보다 약 1.5 cm 아래까지 붓습니다.
표면을 평평하게 하려고 이소프로판올이나 물을 위에 얹고 20~30분 굳힙니다.
위의 액을 버리고, APS와 TEMED를 넣은 농축 겔을 위에 부은 뒤 코움을 꽂습니다.
굳으면 코움을 빼고 웰을 헹굽니다.

중합되지 않은 아크릴아마이드는 신경독입니다. 장갑을 끼고 용액을 조심해서 다루세요.

계산기

SDS-PAGE 겔 계산기는 어떤 농도와 겔 수든 분리 겔과 농축 겔의 모든 부피를 알려 줍니다. 단백질을 같은 양씩 넣으려면 단백질 농도 계산기로 시료를 재세요.

이 가이드에서 쓰는 도구

SDS-PAGE 겔 계산기 단백질 농도 계산기(A280)

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