DNA 카피 수 계산하는 법

공식

카피 수 = (질량 (ng) × 6.022 × 10²³) ÷ (길이 (bp) × 660 × 10⁹)

660 g/mol은 이중 가닥 DNA 염기쌍 하나의 평균 질량(단일 가닥 DNA는 염기당 약 330, RNA는 340)이고, 6.022 × 10²³은 아보가드로 수, 10⁹는 나노그램을 그램으로 바꾸는 계수입니다. 분자가 길수록 1 ng에 든 카피 수는 적습니다.

계산 예시

5,000 bp 플라스미드 1 ng에는 분자가 몇 개 있을까요?

1. 몰질량: 5,000 × 660 = 3.3 × 10⁶ g/mol.
2. 몰수: 1 × 10⁻⁹ g ÷ 3.3 × 10⁶ g/mol = 3.03 × 10⁻¹⁶ mol.
3. 카피 수: 3.03 × 10⁻¹⁶ × 6.022 × 10²³ = 1.8 × 10⁸ 카피.

편리한 어림: 1 kb 조각 1 ng은 약 9 × 10⁸ 카피이고, 1 bp라면 1 ng에 9 × 10¹¹이므로 이를 bp 단위 길이로 나누면 됩니다.

카피 수에서 질량으로

식을 바꾸면 질량 (ng) = 카피 수 × 길이 × 660 × 10⁹ ÷ 6.022 × 10²³. 같은 플라스미드 10⁶ 카피는 10⁶ × 5,000 × 660 × 10⁹ ÷ 6.022 × 10²³ = 5.5 × 10⁻³ ng, 즉 5.5 pg입니다.

qPCR 표준 곡선

절대 정량에는 카피 수를 아는 표준이 필요합니다. 플라스미드 농도를 재고 µL당 카피 수로 바꾼 뒤, 예를 들어 10⁸에서 10² 카피/µL까지 10배 연속 희석을 만듭니다. 시료와 함께 돌리면 log 카피 수에 대한 Ct 그래프가 기울기 −3.3에 가까운 직선(효율 100%)이어야 합니다. 선형화한 플라스미드가 초나선형보다 정확한 표준이 되고, tRNA나 효모 RNA 같은 운반체를 넣으면 카피 수가 적은 희석액이 튜브 벽에 달라붙는 것을 막을 수 있습니다.

계산 도구

DNA 카피 수 계산기는 어떤 길이의 DNA나 RNA든 나노그램과 카피 수를 서로 변환합니다. A260 값에서 농도를 구하려면 DNA 농도 계산기를, 절대 정량 대신 상대 정량에는 ΔΔCt 계산기를 쓰세요.