세포 생존율 계산하는 법

공식

생존율 (%) = 살아 있는 세포 ÷ (살아 있는 세포 + 죽은 세포) × 100

살아 있는 세포와 죽은 세포를 같은 칸에서 세면 희석 배수와 챔버 부피가 상쇄됩니다. 생존율은 비율이므로 mL당 세포 수로 바꿀 필요가 없습니다.

트리판 블루의 원리

트리판 블루는 온전한 세포막을 통과하지 못합니다. 살아 있는 세포는 염료를 배제해 현미경에서 밝게 보이고, 막이 손상된 죽은 세포는 염료를 흡수해 파랗게 됩니다. 세포와 0.4% 트리판 블루를 1:1로 섞고 몇 분 안에 셉니다. 염료에는 독성이 있어 약 5분이 지나면 살아 있는 세포도 염색되기 시작해 생존율이 실제보다 나쁘게 보입니다.

계산 예시

큰 칸 네 개에서 살아 있는 세포가 58, 62, 55, 61(평균 59), 죽은 세포가 6, 8, 5, 9(평균 7)였습니다.

• 생존율 = 59 ÷ (59 + 7) × 100 = 89%.
• 살아 있는 세포 수/mL = 59 × 2(트리판 블루 희석) × 10⁴ = 1.18 × 10⁶.

접종량을 계산할 때는 전체가 아니라 살아 있는 세포 수를 씁니다.

허용되는 값

대수기의 건강한 배양은 생존율이 90%를 넘고, 대부분의 실험은 적어도 85~90%를 요구합니다. 갓 해동한 세포는 60~80%일 수 있으며 한 번 계대하면 회복됩니다. 트립신으로 떼어낸 세포는 몇 퍼센트를 잃고, 트립신에 너무 오래 두거나 거칠게 피펫팅하거나 한 시간 동안 얼음에 둔 세포는 더 잃습니다. 계대 사이에 생존율이 떨어지는 것은 오염, 소진된 배지, 인큐베이터 문제의 초기 신호입니다.

흔한 실수

• 찌꺼기와 염색된 조각을 죽은 세포로 세면 값이 낮아지고, 흐릿하고 부푼 세포를 살아 있는 세포로 세면 값이 높아집니다.
• 죽은 세포는 배양 중 용해되어 사라지므로, 생존율 계수는 최근의 죽음만 보여 줄 뿐 죽은 세포 전부를 나타내지는 않습니다.
• 트리판 블루는 아직 염료를 배제하는 초기 세포자멸사 세포를 놓칩니다. 그것이 중요하다면 유세포 분석으로 아넥신 V나 프로피디움 아이오다이드 같은 염료를 씁니다.

계산 도구

혈구계산판 계산기는 살아 있는 세포와 죽은 세포 수로 생존율과 mL당 살아 있는 세포 수를 구합니다. 세포 분주 계산기는 피펫팅할 양을, 세포 배가 시간 계산기는 계대 사이의 성장을 추적합니다.