공식
넣을 부피 = 바이알 속 질량 ÷ 목표 농도
단위를 맞추세요. mg ÷ mg/mL는 mL, µg ÷ µg/µL는 µL가 됩니다.
예제
- 펩타이드 5 mg을 2 mg/mL로: 5 ÷ 2 = 2.5 mL.
- 항체 100 µg을 0.5 mg/mL(0.5 µg/µL)로: 100 ÷ 0.5 = 200 µL.
- 분자량 1,500 g/mol인 펩타이드 1 mg을 1 mM로: 0.001 g ÷ 1,500 g/mol = 0.667 µmol, 0.667 µmol ÷ 1 mmol/L = 667 µL.
바이알에 실제로 얼마나 들어 있는지 확인
합성 펩타이드 가루가 모두 펩타이드는 아닙니다. 트리플루오로아세트산 같은 반대 이온과 결합수가 무게의 10~30%를 차지하는 경우가 많아, 분석 성적서에 순 펩타이드 함량이 예컨대 80%로 적혀 있습니다. 계산 전에 총 질량에 이 비율을 곱하세요. 5 mg에 80%면 펩타이드는 4 mg입니다. 단백질은 데이터시트에서 양을 확인하고, 녹인 뒤 280 nm 흡광도로 농도를 확인합니다.
용매 고르기
- 먼저 데이터시트를 따르세요. 대부분의 단백질과 항체는 물이나, 동결 건조하기 전의 완충 용액으로 되돌립니다.
- 염기성 잔기(K, R, H)가 많은 펩타이드는 묽은 아세트산 조금에, 산성 잔기(D, E)가 많은 펩타이드는 묽은 탄산수소 암모늄 조금에 더 잘 녹습니다.
- 소수성이 아주 강한 펩타이드는 먼저 소량의 DMSO에 녹인 뒤 완충 용액으로 천천히 희석해야 할 수 있습니다. 시스테인이나 메티오닌이 든 펩타이드는 DMSO가 산화시킬 수 있으니 피하세요.
순서
- 가루에 습기가 맺히지 않도록 열기 전에 바이알을 실온에 둡니다.
- 잠깐 원심분리해 가루를 모두 바닥으로 모읍니다.
- 용매를 바이알 벽을 따라 천천히 넣습니다.
- 살살 돌리거나 굴린 뒤 15~30분 둡니다. 단백질을 세게 볼텍싱하면 변성되고 거품이 날 수 있습니다.
- 계속 뿌옇다면 펩타이드는 짧은 초음파 수조가 도움이 됩니다. 그래도 남은 입자는 녹지 않은 것이니 원심분리해 가라앉히고 상층액의 농도를 재세요.
보관
얼렸다 녹일 때마다 활성이 떨어질 수 있으니 한 번 쓸 양씩 나눠 −20 °C나 −80 °C에 얼립니다. 약 0.1 mg/mL보다 묽은 단백질은 튜브 벽에 달라붙습니다. 실험에 방해되지 않는다면 0.1% BSA 같은 운반 단백질을 넣어 막을 수 있습니다.
계산기
재구성(용해) 계산기는 목표 농도에 필요한 부피, 또는 부피에서 농도를 질량 단위나 몰 단위로 구합니다. 결과는 단백질 농도 계산기(A280)로 확인하고, 작업 희석은 스톡 용액 계산기로 계획하세요.