লায়োফিলাইজড প্রোটিন বা পেপটাইড কীভাবে আবার গুলবেন

সূত্র

যোগ করার আয়তন = ভায়ালের ভর ÷ লক্ষ্য ঘনমাত্রা

এককগুলো মিলিয়ে রাখুন: mg ÷ mg/mL দেয় mL, আর µg ÷ µg/µL দেয় µL।

উদাহরণ

• 5 mg পেপটাইড 2 mg/mL-এ: 5 ÷ 2 = 2.5 mL।
• 100 µg অ্যান্টিবডি 0.5 mg/mL-এ (0.5 µg/µL): 100 ÷ 0.5 = 200 µL।
• 1,500 g/mol-এর একটি পেপটাইডের 1 mg, 1 mM-এ: 0.001 g ÷ 1,500 g/mol = 0.667 µmol, আর 0.667 µmol ÷ 1 mmol/L = 667 µL।

ভায়ালে আসলে কতটা আছে দেখে নিন

সিনথেটিক পেপটাইডের গুঁড়ো পুরোটা পেপটাইড নয়। ট্রাইফ্লুরোঅ্যাসিটেটের মতো প্রতি-আয়ন আর আবদ্ধ পানি প্রায়ই ওজনের 10% থেকে 30%, তাই বিশ্লেষণ সনদে নিট পেপটাইডের পরিমাণ লেখা থাকতে পারে, ধরুন 80%। হিসাবের আগে মোট ভরকে এই ভগ্নাংশ দিয়ে গুণ করুন: 80%-এ 5 mg মানে 4 mg পেপটাইড। প্রোটিনের ক্ষেত্রে ডেটাশিটে পরিমাণ দেখে নিন, আর গোলার পর 280 nm-এ শোষণ দিয়ে ঘনমাত্রা নিশ্চিত করুন।

দ্রাবক বাছাই

• আগে ডেটাশিট মানুন। বেশিরভাগ প্রোটিন আর অ্যান্টিবডি পানিতে, বা যে বাফার থেকে শুকানো হয়েছিল সেই বাফারে, আবার গোলা হয়।
• বেশি ক্ষারীয় অবশেষ (K, R, H) থাকা পেপটাইড অল্প লঘু অ্যাসিটিক অ্যাসিডে ভালো গোলে; অম্লীয়গুলো (D, E) অল্প লঘু অ্যামোনিয়াম বাইকার্বনেটে।
• খুব হাইড্রোফোবিক পেপটাইডের আগে অল্প DMSO, তারপর বাফারে ধীরে লঘুকরণ লাগতে পারে। সিস্টিন বা মিথিওনিন থাকা পেপটাইডে DMSO এড়িয়ে চলুন, কারণ এটি সেগুলোকে জারিত করতে পারে।

ধাপ

1. খোলার আগে ভায়ালকে ঘরের তাপমাত্রায় আসতে দিন, যাতে গুঁড়োর ওপর আর্দ্রতা না জমে।
2. অল্প সময় সেন্ট্রিফিউজ করুন যাতে সব গুঁড়ো তলায় আসে।
3. দ্রাবক ভায়ালের দেয়াল বেয়ে ধীরে দিন।
4. আলতো করে ঘোরান বা গড়িয়ে দিন, তারপর 15 থেকে 30 মিনিট রেখে দিন। প্রোটিন জোরে ভর্টেক্স করবেন না, এতে তা বিকৃত হতে আর ফেনা হতে পারে।
5. ঘোলা থেকে গেলে পেপটাইডের জন্য অল্প সময়ের আলট্রাসোনিক বাথ সাহায্য করতে পারে। এরপরও যে কণা থাকে তা গোলেনি: সেন্ট্রিফিউজ করে তলায় বসিয়ে ওপরের তরলের ঘনমাত্রা মাপুন।

রেখে দেওয়া

দ্রবণকে একবার ব্যবহারের অ্যালিকটে ভাগ করে −20 °C বা −80 °C-এ জমিয়ে রাখুন, কারণ প্রতিবার জমানো-গলানোয় সক্রিয়তা কমতে পারে। প্রায় 0.1 mg/mL-এর চেয়ে লঘু প্রোটিন টিউবের দেয়ালে লেগে যায়; পরীক্ষায় সমস্যা না হলে 0.1% BSA-র মতো বাহক প্রোটিন এটি আটকায়।

হিসাবের টুল

আবার গুলিয়ে নেওয়ার হিসাব লক্ষ্য ঘনমাত্রার জন্য আয়তন, বা আয়তন থেকে ঘনমাত্রা, ভর বা মোলার এককে দেয়। ফলটি প্রোটিনের ঘনমাত্রার হিসাব (A280) দিয়ে যাচাই করুন, আর কাজের লঘুকরণ স্টক দ্রবণের হিসাব দিয়ে ঠিক করুন।