প্রোটিনের ঘনমাত্রার হিসাব (A280)

A280 থেকে প্রোটিনের ঘনমাত্রা কীভাবে হিসাব করবেন

1. A280 পাঠ, লঘুকরণের গুণক আর পথের দৈর্ঘ্য লিখুন।
2. শোষণ গুণাঙ্কটি কোথা থেকে আসবে তা বেছে নিন: প্রোটিনের সিকোয়েন্স সেঁটে দিন, মোলার গুণাঙ্ক ও আণবিক ভর লিখুন, না Abs 0.1% লিখুন।
3. ঘনমাত্রাটি mg/mL-এ চলে আসে, আর আণবিক ভর জানা থাকলে µM-এও।

সাধারণ প্রশ্ন

সিকোয়েন্স থেকে শোষণ গুণাঙ্ক কীভাবে বের হয়?

Pace ও সহকর্মীদের (1995) উপায়ে: প্রতিটি ট্রিপ্টোফ্যানের জন্য 5,500 M⁻¹ cm⁻¹, প্রতিটি টাইরোসিনের জন্য 1,490 আর প্রতিটি সিস্টিনের (ডাইসালফাইড বন্ধনে এক জোড়া সিস্টিন) জন্য 125। সিস্টিনগুলো মুক্ত থাকলে “বিজারিত” বেছে নিন।

Abs 0.1% কী?

1 সেমি ঘরে 1 mg/mL দ্রবণের 280 nm-এ শোষণ, যা শোষণ গুণাঙ্ক ভাগ আণবিক ভর। mg/mL-এ ঘনমাত্রা = A280 ÷ Abs 0.1%।

এটি আমার প্রোটিনে চলছে না কেন?

যে প্রোটিনে ট্রিপ্টোফ্যান বা টাইরোসিন নেই, তা 280 nm-এ প্রায় কিছুই শোষণ করে না। ব্র্যাডফোর্ড বা BCA-র মতো একটি রং-নির্ভর পরীক্ষা ব্যবহার করুন, কিংবা 205 nm-এ মাপুন।