একটি আদর্শ বাঁক যা করে
অনেক পরখ, যেমন ব্র্যাডফোর্ড, BCA, ELISA আর qPCR, এমন একটি পাঠ দেয় যা ঘনমাত্রার সঙ্গে বাড়ে, কিন্তু কোনো বাঁধা, জানা পরিমাণে নয়। জানা ঘনমাত্রার নমুনা, অর্থাৎ আদর্শগুলো, একই সঙ্গে মাপলে দেখা যায় ওই চালে পাঠ আর ঘনমাত্রার সম্পর্ক কী, আর অজানা নমুনা ওই সম্পর্ক থেকেই পড়ে নেওয়া হয়।
আদর্শ তৈরি করা
- আপনার আশা করা পরিসর ছুঁয়ে যাওয়া 5 থেকে 8টি আদর্শ নিন, একটি ব্ল্যাংক (শূন্য) সহ।
- আপনার নমুনার একই বাফারেই সেগুলো বানান, যাতে বাফারের প্রভাব দুটিতেই সমান পড়ে।
- একটিমাত্র স্টক থেকে লঘু করে সেগুলো তৈরি করুন, আর নমুনার পাশে দুই বা তিনবার চালান।
রেখাটি বসানো
ঘনমাত্রার বিপরীতে পাঠ আঁকুন আর ন্যূনতম বর্গের উপায়ে একটি সরলরেখা বসান, পাঠ = ঢাল × ঘনমাত্রা + ছেদ। তারপর প্রতিটি অজানার জন্য:
ঘনমাত্রা = (পাঠ − ছেদ) ÷ ঢাল
মাপার আগে নমুনাটি লঘু করা হলে লঘুকরণের গুণক দিয়ে গুণ করুন।
একটি কষে দেখানো উদাহরণ
0, 250, 500 আর 1,000 µg/mL-র BSA আদর্শ দেয় 0.05, 0.37, 0.66 আর 1.21 শোষণ। বসানো রেখাটি প্রায় পাঠ = 0.00115 × ঘনমাত্রা + 0.068। 1:5 লঘু করা একটি নমুনা 0.48 পড়ে: (0.48 − 0.068) ÷ 0.00115 = কুয়োয় 358 µg/mL, অর্থাৎ মূল নমুনায় প্রায় 1.8 mg/mL।
বাঁকটি বিচার করা
- R² প্রায় 0.99-র ওপরেই চলতি। তার চেয়ে কম মান একটি পিপেট করার ভুল কিংবা একটি বেমানান বিন্দুর ইশারা দেয়।
- আদর্শের ভেতরেই থাকুন। সবচেয়ে বড় আদর্শের ওপরের পাঠ বাইরে বাড়িয়ে নেওয়া; নমুনাটি লঘু করে আবার মাপুন।
- বাঁকা হয়ে যাওয়ায় চোখ রাখুন। অনেক পরখ বেশি ঘনমাত্রায় চ্যাপ্টা হয়ে যায়। যে ওপরের আদর্শগুলো বেঁকে সরে যায় সেগুলো বাদ দিন, কিংবা একটি সরু পরিসর নিন।
হিসাব
আদর্শ বাঁকের হিসাব রেখাটি বসায়, R² দেয় আর প্রতিটি অজানা তার লঘুকরণ ধরে বের করে দেয়। আদর্শগুলো সাজান ক্রমিক লঘুকরণের হিসাব দিয়ে; শোধন করা প্রোটিনে প্রোটিনের ঘনমাত্রার হিসাব (A280) একটি বাঁকের বদলে A280-ই ব্যবহার করে।