কোষ বসানোর ঘনত্ব কীভাবে বের করবেন

বসানোর ঘনত্ব ক্ষেত্রফল ধরেই

সেঁটে বসা কোষ সাধারণত বাড়ার ক্ষেত্রফলের প্রতি cm²-এ কোষের একটি ঘনত্বে বসানো হয়, তাই একই ঘনত্ব যেকোনো পাত্রেই একই ঢাকা দেয়। চলতি বাড়ার ক্ষেত্রফল:

• 96-কুয়োর প্লেট: প্রতি কুয়োয় 0.32 cm²
• 24-কুয়োর প্লেট: প্রতি কুয়োয় 1.9 cm²
• 12-কুয়োর প্লেট: প্রতি কুয়োয় 3.8 cm²
• 6-কুয়োর প্লেট: প্রতি কুয়োয় 9.5 cm²
• T25, T75 আর T175 ফ্লাস্ক: 25, 75 আর 175 cm²

বানানেওয়ালার পত্রটি দেখে নিন; ব্র্যান্ডে ব্র্যান্ডে ক্ষেত্রফল একটু আলাদা।

তিনটি ধাপ

1. প্রতি পাত্রে দরকারি কোষ = ঘনত্ব × ক্ষেত্রফল। একটি 6-কুয়োর প্লেটে 20,000 কোষ/cm²-এ: 20,000 × 9.5 = প্রতি কুয়োয় 190,000 কোষ।
2. মোট কোষ = প্রতি পাত্রে কোষ × পাত্রের সংখ্যা, আর তার সঙ্গে পিপেট করায় হারানোর জন্য প্রায় 10%। ছয়টি কুয়ো: 190,000 × 6 × 1.1 = 1,254,000 কোষ।
3. ঝুলনের আয়তন = মোট কোষ ÷ কোষ/mL-এ আপনার গোনা। হিমোসাইটোমিটার থেকে 1,000,000 কোষ/mL হলে: 1.25 mL, যা আপনার দরকারি মোট আয়তন পর্যন্ত মাধ্যম দিয়ে ভরে নেওয়া (6 × 2 mL = 12 mL, আর তার সঙ্গে 10%)।

ঘনত্বটি বাছা

ঘনত্ব নির্ভর করে কোষ সারির ওপরে আর আপনি কোষগুলো কখন ব্যবহার করতে চান তার ওপরে। একটি দেওয়া দিনে একটি লক্ষ্য ঢাকায় পৌঁছাতে দ্বিগুণ হওয়ার সময় থেকে উল্টো দিকে কষুন: পাস করানোর ধাক্কা থেকে সামলে উঠলে, যা সাধারণত প্রায় একদিন পরে, কোষ প্রতিটি দ্বিগুণ হওয়ার সময়ে একবার দ্বিগুণ হয়। 25% ঢাকায় বসানো যে সারি প্রতি 24 ঘণ্টায় দ্বিগুণ হয় তা দুই থেকে তিন দিনেই পুরো ঢাকার কাছাকাছি। বেশির ভাগ সারির জন্য সরবরাহকারীর তথ্যপত্র আর ছাপা পদ্ধতিই একটি শুরুর ঘনত্ব দেয়।

একটি সমান স্তর পাওয়া

প্রতিবার ঢালার ঠিক আগেই ঝুলনটি মিশিয়ে নিন, কারণ কোষ এক-দুই মিনিটেই থিতিয়ে পড়ে। বসানোর পরে প্লেটগুলো ঘোরানোর বদলে একটি ক্রুশের ছকে (সামনে-পিছনে, বাঁয়ে-ডানে) সরান, কারণ ঘোরালে কোষ প্রতিটি কুয়োর ধারে ঠেলে যায়, আর ইনকিউবেটরে সরানোর আগে সেগুলোকে 15 থেকে 30 মিনিট থিতিয়ে পড়তে দিন।

সরঞ্জাম

হিমোসাইটোমিটারের হিসাব দিয়ে কোষ গুনুন, তারপর গোনা আর ঘনত্ব কোষ বসানোর হিসাব-এ লিখে প্লেট আর ফ্লাস্কের জন্য ঝুলন ও মাধ্যমের আয়তন পেয়ে নিন। কোষের দ্বিগুণ হওয়ার সময়ের হিসাব দুটি গোনা থেকে দ্বিগুণ হওয়ার সময় বের করে দেয়।