একটি হিমোসাইটোমিটার দিয়ে কোষ কীভাবে গুনবেন

গোনা

1. কোষগুলো ট্রিপ্যান ব্লু-র সঙ্গে মিশিয়ে নিন, প্রায়ই 1:1, যা মরা কোষকে নীল রঙে রাঙায়।
2. কাভারস্লিপের নিচে প্রায় 10 µL ভরে দিন।
3. চারটি বড় কোনার চৌকোর না-রাঙানো কোষ গুনুন। ওপরের আর বাঁ দিকের রেখা ছোঁয়া কোষ গুনুন, তলার আর ডান দিকের নয়, যাতে কোনোটি দুবার গোনা না হয়।
4. জীবিত থাকার হার চাইলে নীল কোষগুলো আলাদা করে গুনুন।

সূত্রটি

প্রতিটি বড় চৌকো 1 mm × 1 mm আর 0.1 mm গভীর, যা 0.1 µL, অর্থাৎ 10⁻⁴ mL। তাই:

প্রতি mL-এ কোষ = চৌকো প্রতি গড় গোনা × লঘুকরণের গুণক × 10⁴

50, 46, 52 আর 48 গোনায় গড় 49। 1:1 ট্রিপ্যান ব্লু লঘুকরণে (গুণক 2): 49 × 2 × 10⁴ = 9.8 × 10⁵ কোষ/mL।

জীবিত থাকার হার হলো জীবিত কোষ ভাগ সব কোষ, গুণ 100।

কষে দেখানো উদাহরণ

• লঘুকরণ ছাড়া: 120, 132, 118 আর 126 গোনায় গড় 124। প্রতি mL-এ কোষ = 124 × 1 × 10⁴ = 1.24 × 10⁶ কোষ/mL।
• 1:1 ট্রিপ্যান ব্লু, মরা কোষসহ: জীবিতের গোনায় গড় 62 আর মরার গোনায় গড় 8। প্রতি mL-এ জীবিত কোষ = 62 × 2 × 10⁴ = 1.24 × 10⁶ কোষ/mL; জীবিত থাকার হার = 62 ÷ (62 + 8) = 89%।
• বেশি ঘন, তাই আগে 1:10 লঘু করা: একটি 1:10 লঘুকরণ আর তারপর ট্রিপ্যান ব্লু-তে 1:1-র পরে গোনায় গড় 45 (মোট গুণক 20)। মূল ঝুলনটিতে প্রতি mL-এ কোষ = 45 × 20 × 10⁴ = 9 × 10⁶ কোষ/mL।
• মোট কোষ আর বসানোর আয়তন: 10 mL-এ 1.24 × 10⁶ কোষ/mL মানে 1.24 × 10⁷ কোষ। 5 × 10⁵ কোষ বসাতে নিন 5 × 10⁵ ÷ 1.24 × 10⁶ = 0.40 mL।

লঘুকরণের গুণক ঠিক রাখা

লঘুকরণের গুণক হলো মোট আয়তন ভাগ তার ভেতরে থাকা কোষের ঝুলনের আয়তন। সমান ভাগে কোষ আর ট্রিপ্যান ব্লু হলে 2; 900 µL মাধ্যমে 100 µL কোষ হলে 10; দুটিই করলে 20। চৌকো প্রতি প্রায় 20-র কম কিংবা প্রায় 200-র বেশি কোষ গুনলে আন্দাজ খারাপ হয়, তাই ঘন ঝুলন লঘু করে নিন আর পাতলাগুলোর জন্য আরও চৌকো গুনুন।

দ্বিগুণ হওয়ার সময়

দুটি গোনা থেকে: দ্বিগুণ হওয়ার সময় = সময় × ln 2 ÷ ln(N₂ ÷ N₁)। যে কোষ 48 ঘণ্টায় 1 × 10⁵ থেকে 8 × 10⁵ হয়েছে তা তিনবার দ্বিগুণ হয়েছে, প্রতি 16 ঘণ্টায় একবার।

হিসাব

হিমোসাইটোমিটারের হিসাব প্রতি mL-এ কোষ, জীবিত থাকার হার আর একটি লক্ষ্য কোষ সংখ্যার জন্য বসানোর আয়তন দেয়। কোষের দ্বিগুণ হওয়ার সময়ের হিসাব দ্বিগুণ হওয়ার সময় আর বাড়ার হার বের করে দেয়।