Como contar células com um hemocitômetro

A contagem

1. Misture as células com azul de tripano, muitas vezes 1:1, que cora de azul as células mortas.
2. Carregue cerca de 10 µL sob a lamínula.
3. Conte as células não coradas nos quatro quadrados grandes dos cantos. Conte as que tocam as linhas de cima e da esquerda, mas não as de baixo e da direita, para não contar nenhuma duas vezes.
4. Conte as células azuis à parte se quiser a viabilidade.

A fórmula

Cada quadrado grande mede 1 mm × 1 mm com 0,1 mm de profundidade, ou seja, 0,1 µL, ou 10⁻⁴ mL. Então:

células por mL = média por quadrado × fator de diluição × 10⁴

Contagens de 50, 46, 52 e 48 dão média 49. Com diluição 1:1 em azul de tripano (fator 2): 49 × 2 × 10⁴ = 9,8 × 10⁵ células/mL.

A viabilidade é o número de células vivas dividido pelo total, vezes 100.

Tempo de duplicação

A partir de duas contagens: tempo de duplicação = tempo × ln 2 ÷ ln(N₂ ÷ N₁). Células que passam de 1 × 10⁵ para 8 × 10⁵ em 48 horas duplicaram três vezes, uma a cada 16 horas.

Calculadoras

A Calculadora de hemocitômetro dá as células por mL, a viabilidade e o volume a semear para um número de células desejado. A Calculadora de tempo de duplicação celular calcula o tempo de duplicação e a taxa de crescimento.