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Como contar células com um hemocitômetro

A contagem

  1. Misture as células com azul de tripano, muitas vezes 1:1, que cora de azul as células mortas.
  2. Carregue cerca de 10 µL sob a lamínula.
  3. Conte as células não coradas nos quatro quadrados grandes dos cantos. Conte as que tocam as linhas de cima e da esquerda, mas não as de baixo e da direita, para não contar nenhuma duas vezes.
  4. Conte as células azuis à parte se quiser a viabilidade.

A fórmula

Cada quadrado grande mede 1 mm × 1 mm com 0,1 mm de profundidade, ou seja, 0,1 µL, ou 10−4 mL. Então:

células por mL = média por quadrado × fator de diluição × 104

Contagens de 50, 46, 52 e 48 dão média 49. Com diluição 1:1 em azul de tripano (fator 2): 49 × 2 × 104 = 9,8 × 105 células/mL.

A viabilidade é o número de células vivas dividido pelo total, vezes 100.

Exemplos resolvidos

  • Sem diluição: contagens de 120, 132, 118 e 126 dão média 124. Células por mL = 124 × 1 × 104 = 1,24 × 106 células/mL.
  • Azul de tripan 1:1, com células mortas: a média de vivas é 62 e a de mortas é 8. Células vivas por mL = 62 × 2 × 104 = 1,24 × 106 células/mL; viabilidade = 62 ÷ (62 + 8) = 89%.
  • Densa demais, diluída 1:10 antes: a média é 45 depois de diluir 1:10 e misturar 1:1 com azul de tripan (fator total 20). Células por mL = 45 × 20 × 104 = 9 × 106 células/mL na suspensão original.
  • Total de células e volume a semear: 1,24 × 106 células/mL em 10 mL são 1,24 × 107 células. Para semear 5 × 105 células, pegue 5 × 105 ÷ 1,24 × 106 = 0,40 mL.

Acertando o fator de diluição

O fator de diluição é o volume total dividido pelo volume de suspensão celular que ele contém. Partes iguais de células e azul de tripan dá 2; 100 µL de células em 900 µL de meio dá 10; fazer os dois dá 20. Contar menos de cerca de 20 ou mais de cerca de 200 células por quadrado dá estimativas ruins, então dilua suspensões densas e conte mais quadrados nas pouco densas.

Tempo de duplicação

A partir de duas contagens: tempo de duplicação = tempo × ln 2 ÷ ln(N2 ÷ N1). Células que passam de 1 × 105 para 8 × 105 em 48 horas duplicaram três vezes, uma a cada 16 horas.

Calculadoras

A Calculadora de hemocitômetro dá as células por mL, a viabilidade e o volume a semear para um número de células desejado. A Calculadora de tempo de duplicação celular calcula o tempo de duplicação e a taxa de crescimento.

Ferramentas deste guia

Calculadora de hemocitômetroCalculadora de tempo de duplicação celularCalculadora de diluição

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