सेल सीडिंग डेंसिटी कैसे निकालें

सीडिंग डेंसिटी क्षेत्रफल के हिसाब से होती है

चिपकने वाली कोशिकाएँ आम तौर पर उगने वाले क्षेत्र के प्रति cm² कोशिकाओं की डेंसिटी पर डाली जाती हैं, ताकि एक ही डेंसिटी हर बर्तन में एक जैसा कवरेज दे। आम क्षेत्रफल:

• 96-वेल प्लेट: हर वेल 0.32 cm²
• 24-वेल प्लेट: हर वेल 1.9 cm²
• 12-वेल प्लेट: हर वेल 3.8 cm²
• 6-वेल प्लेट: हर वेल 9.5 cm²
• T25, T75 और T175 फ़्लास्क: 25, 75 और 175 cm²

निर्माता की शीट देखें; ब्रांड के हिसाब से क्षेत्रफल थोड़ा बदलता है।

तीन चरण

1. हर बर्तन की कोशिकाएँ = डेंसिटी × क्षेत्रफल। 6-वेल प्लेट में 20,000 कोशिकाएँ/cm² पर: 20,000 × 9.5 = हर वेल में 1,90,000 कोशिकाएँ।
2. कुल कोशिकाएँ = हर बर्तन की कोशिकाएँ × बर्तनों की संख्या, जमा पिपेटिंग नुक़सान के लिए लगभग 10%। छह वेल: 1,90,000 × 6 × 1.1 = 12,54,000 कोशिकाएँ।
3. सस्पेंशन का आयतन = कुल कोशिकाएँ ÷ आपकी गिनती (कोशिकाएँ/mL)। हीमोसाइटोमीटर से 10,00,000 कोशिकाएँ/mL हों तो 1.25 mL, जिसे मीडियम से कुल ज़रूरी आयतन तक भरें (6 × 2 mL = 12 mL, जमा 10%)।

डेंसिटी चुनना

डेंसिटी सेल लाइन पर और इस पर निर्भर है कि कोशिकाएँ कब इस्तेमाल करनी हैं। किसी तय दिन तक तय कन्फ़्लुएंस पाने के लिए डबलिंग टाइम से उल्टा हिसाब लगाएँ: पैसेज से उबरने के बाद, आम तौर पर लगभग एक दिन बाद, कोशिकाएँ हर डबलिंग टाइम में एक बार दोगुनी होती हैं। हर 24 घंटे में दोगुनी होने वाली लाइन 25% कवरेज पर डालने से दो-तीन दिन में लगभग कन्फ़्लुएंट हो जाती है। सप्लायर की डेटाशीट और प्रकाशित प्रोटोकॉल ज़्यादातर लाइनों के लिए शुरुआती डेंसिटी बताते हैं।

बराबर परत

हर ट्रांसफ़र से ठीक पहले सस्पेंशन मिलाएँ, क्योंकि कोशिकाएँ एक-दो मिनट में नीचे बैठ जाती हैं। सीडिंग के बाद प्लेट को गोल घुमाने के बजाय क्रॉस में हिलाएँ (आगे-पीछे, दाएँ-बाएँ), क्योंकि गोल घुमाने से कोशिकाएँ वेल के किनारे जाती हैं, और इनक्यूबेटर में रखने से पहले 15 से 30 मिनट बैठने दें।

टूल

हीमोसाइटोमीटर कैलकुलेटर से कोशिकाएँ गिनें, फिर गिनती और डेंसिटी सेल सीडिंग कैलकुलेटर में डालें, जो प्लेट और फ़्लास्क के लिए सस्पेंशन और मीडियम का आयतन देता है। सेल डबलिंग टाइम कैलकुलेटर दो गिनतियों से डबलिंग टाइम निकालता है।