Calculadora de concentración de proteínas (A280)

Cómo calcular la concentración de proteínas a partir de A280

1. Escribe la lectura de A280, el factor de dilución y el paso óptico.
2. Elige de dónde sale el coeficiente de extinción: pega la secuencia de la proteína, escribe el coeficiente molar y el peso molecular, o escribe la Abs 0,1%.
3. La concentración aparece en mg/mL, y en µM cuando se conoce el peso molecular.

Preguntas frecuentes

¿Cómo se calcula el coeficiente de extinción a partir de la secuencia?

Con el método de Pace et al. (1995): 5500 M⁻¹ cm⁻¹ por cada triptófano, 1490 por cada tirosina y 125 por cada cistina (par de cisteínas en un puente disulfuro). Elige Reducidas si las cisteínas están libres.

¿Qué es la Abs 0,1%?

La absorbancia a 280 nm de una solución de 1 mg/mL en una cubeta de 1 cm, que es el coeficiente de extinción dividido por el peso molecular. Concentración en mg/mL = A280 ÷ Abs 0,1%.

¿Por qué no funciona con mi proteína?

Las proteínas sin triptófano ni tirosina casi no absorben a 280 nm. Usa un ensayo colorimétrico como Bradford o BCA, o mide a 205 nm.