Calcul de la concentration en protéines (A280)

Comment calculer la concentration en protéines à partir de l’A280

1. Saisissez la mesure d’A280, le facteur de dilution et le trajet optique.
2. Choisissez l’origine du coefficient d’extinction : collez la séquence protéique, saisissez le coefficient molaire et la masse moléculaire, ou saisissez l’Abs 0,1 %.
3. La concentration s’affiche en mg/mL, et en µM si la masse moléculaire est connue.

Questions fréquentes

Comment le coefficient d’extinction est-il calculé d’après la séquence ?

Selon la méthode de Pace et al. (1995) : 5 500 M⁻¹ cm⁻¹ par tryptophane, 1 490 par tyrosine et 125 par cystine (paire de cystéines en pont disulfure). Choisissez Réduites si les cystéines sont libres.

Qu’est-ce que l’Abs 0,1 % ?

L’absorbance à 280 nm d’une solution à 1 mg/mL dans une cuve de 1 cm, c’est-à-dire le coefficient d’extinction divisé par la masse moléculaire. Concentration en mg/mL = A280 ÷ Abs 0,1 %.

Pourquoi cela ne marche-t-il pas avec ma protéine ?

Les protéines sans tryptophane ni tyrosine n’absorbent presque pas à 280 nm. Utilisez un dosage colorimétrique comme Bradford ou BCA, ou mesurez à 205 nm.