Kalkulator Konsentrasi Protein (A280)

Cara menghitung konsentrasi protein dari A280

1. Ketik pembacaan A280, faktor pengenceran, dan panjang lintasan.
2. Pilih sumber koefisien ekstingsi: tempel sekuens protein, ketik koefisien molar dan berat molekul, atau ketik Abs 0,1%.
3. Konsentrasi muncul dalam mg/mL, dan dalam µM jika berat molekul diketahui.

Pertanyaan umum

Bagaimana koefisien ekstingsi dihitung dari sekuens?

Dengan metode Pace dkk. (1995): 5.500 M⁻¹ cm⁻¹ per triptofan, 1.490 per tirosin, dan 125 per sistin (pasangan sistein dalam ikatan disulfida). Pilih Tereduksi jika sisteinnya bebas.

Apa itu Abs 0,1%?

Absorbansi pada 280 nm larutan 1 mg/mL dalam kuvet 1 cm, yaitu koefisien ekstingsi dibagi berat molekul. Konsentrasi dalam mg/mL = A280 ÷ Abs 0,1%.

Mengapa tidak bisa untuk protein saya?

Protein tanpa triptofan dan tirosin hampir tidak menyerap pada 280 nm. Pakai uji pewarna seperti Bradford atau BCA, atau ukur pada 205 nm.