Calculadora de concentração de proteínas (A280)
Como calcular a concentração de proteínas pela A280
- Digite a leitura de A280, o fator de diluição e o caminho óptico.
- Escolha de onde vem o coeficiente de extinção: cole a sequência da proteína, digite o coeficiente molar e o peso molecular, ou digite a Abs 0,1%.
- A concentração aparece em mg/mL, e em µM quando o peso molecular é conhecido.
Perguntas frequentes
Como o coeficiente de extinção é calculado pela sequência?
Pelo método de Pace et al. (1995): 5.500 M⁻¹ cm⁻¹ por triptofano, 1.490 por tirosina e 125 por cistina (par de cisteínas em ponte dissulfeto). Escolha Reduzidas se as cisteínas estiverem livres.
O que é a Abs 0,1%?
A absorbância a 280 nm de uma solução de 1 mg/mL numa cubeta de 1 cm, que é o coeficiente de extinção dividido pelo peso molecular. Concentração em mg/mL = A280 ÷ Abs 0,1%.
Por que não funciona com a minha proteína?
Proteínas sem triptofano nem tirosina quase não absorvem a 280 nm. Use um ensaio colorimétrico como Bradford ou BCA, ou meça a 205 nm.
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