Calculadora ΔΔCt

Como calcular a variação de expressão com ΔΔCt

1. Digite os Ct do gene-alvo e do gene de referência nas amostras tratada e controle. Várias réplicas separadas por espaços são promediadas.
2. Deixe as duas eficiências em 100% para o método 2^-ΔΔCt, ou digite as eficiências medidas para usar o método de Pfaffl.
3. Aparece a variação de expressão da amostra tratada em relação ao controle, com ΔCt, ΔΔCt e o log2 da variação.

Perguntas frequentes

Qual é a fórmula?

ΔCt = Ct alvo − Ct referência em cada amostra, ΔΔCt = ΔCt tratado − ΔCt controle, e variação = 2^-ΔΔCt.

Quando usar as eficiências dos primers?

Quando elas se afastam de 100% ou diferem entre si. A razão de Pfaffl é E alvo^(Ct alvo controle − Ct alvo tratado) ÷ E referência^(Ct referência controle − Ct referência tratado), com E = 1 + eficiência. Com as duas em 100%, dá o mesmo que 2^-ΔΔCt.

O que significa uma variação menor que 1?

Que o alvo é menos expresso na amostra tratada do que no controle. Uma variação de 0,5 é um log2 de −1, metade da expressão.